產(chǎn)品分類:微生物染色
儲(chǔ)存條件:4℃,12個(gè)月
用途:用于細(xì)菌的理化性質(zhì)鑒定,細(xì)菌蛋白酶(胞外酶)水解明膠,由原來的固態(tài)變?yōu)橐簯B(tài),即為明膠液化,由此可判斷該細(xì)菌有無分解蛋白質(zhì)的能力,可以用穿刺法和平板法進(jìn)行該試驗(yàn)。
注意事項(xiàng):常規(guī)狀態(tài)下應(yīng)該是凝固態(tài),可用80~100℃熱水助溶后到平板或小量分裝后使用。
公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、易保存等特點(diǎn),咨詢并訂購(gòu)!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
明膠液化試驗(yàn)試劑 | 100ml | FS-R7038 |
配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理:
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一種白色晶體粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑,基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理:稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層,然后用水洗凈,烘干。
配制步驟:
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自來水、純水洗凈,烘干、冷卻。
2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15~0.2g Zn,蓋好小表面皿。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中,用純水稀釋至標(biāo)線,搖勻。
實(shí)驗(yàn)方法與判定:
1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性
2.對(duì)照品溶液的配制:精密量取腦對(duì)照品適量,加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。
3.色譜條件:以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱;柱溫120℃;進(jìn)樣口溫度250℃;檢測(cè)器溫度250℃;分流進(jìn)樣,分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。
4.實(shí)驗(yàn)方法:配制的對(duì)照品溶液,一份置冷處保存,一份置室溫中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液,三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來,保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過2.0%,驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型,培養(yǎng)基,生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應(yīng)性曲線,來確定最佳篩選濃度。
一般而言,哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL;細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株,需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度,可通過建立殺滅曲線(劑量反應(yīng)曲線)來實(shí)現(xiàn),至少選擇5個(gè)濃度。
1) 第一天:未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,CO2培養(yǎng)過夜;注:對(duì)于需要更高密度來檢測(cè)活力的細(xì)胞,可增加接種量。
2) 根據(jù)細(xì)胞類型,設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例,可設(shè)定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。
3) 第二天:替換舊的培養(yǎng)基,換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。
4) 接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10天)內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。
3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選
1) 轉(zhuǎn)染48h后,用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密,其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3) 篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間,這取決于宿主細(xì)胞類型,轉(zhuǎn)染,以及篩選效果。
4) 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。
凸臍儒孢菌CD20抗體Human HEV-IgM(hepatitis E virus-Immunoglobulin M) ELISA Kit人鋅指蛋白R(shí)IZ(PRDM2)免疫試劑盒
古布爾班克氏菌屬12號(hào)染色體開放閱讀框40抗體Human SCRG1(Scrapie responsive protein 1) ELISA Kit人鋅指蛋白644(ZNF644)免疫試劑盒
鼠強(qiáng)對(duì)照液(乙乙酯介質(zhì))12號(hào)染色體開放閱讀框42抗體Human alpha 1 microglobulin ELISA Kit人鋅α2糖蛋白(AZGP1)免疫試劑盒
瓜果腐霉11號(hào)染色體開放閱讀框46抗體Human LAMTOR1(Ragulator complex protein LAMTOR1) ELISA Kit人心型脂肪結(jié)合蛋白(h-FABP)免疫試劑盒
粗糙艾耳球蟲11號(hào)染色體開放閱讀框67抗體Human EZH2(Enhancer of zeste homolog 2) ELISA Kit人心肌營(yíng)養(yǎng)1(CT-1)免疫試劑盒
高盧蜜環(huán)菌11號(hào)染色體開放閱讀框77抗體Human HBcAb(hepatitis B virus Core antibody) ELISA Kit人心肌特異性肌鈣蛋白T(c)免疫試劑盒
玫瑰變紅鏈霉菌11號(hào)染色體開放閱讀框16抗體Human PHF6(PHD finger protein 6) ELISA Kit人心肌錨蛋白重復(fù)域1(ANKRD1)免疫試劑盒
云微所奇異球菌11號(hào)染色體開放閱讀框21抗體Human HAV-IgM(hepatitis A virus-Immunoglobulin M) ELISA Kit人心肌肌球蛋白重鏈(MHC)自身抗體免疫試劑盒
芽孢桿菌屬11號(hào)染色體開放閱讀框24抗體Human Cytochrome b-245 Beta Polypeptide ELISA Kit人心肌肌凝蛋白輕鏈1(CMLC-1)免疫試劑盒
馬賽菌11號(hào)染色體開放閱讀框53抗體Human NADPH oxidase 5 ELISA Kit人心肌肌鈣蛋白T(cTn-T)免疫試劑盒
林地蘑菇11號(hào)染色體開放閱讀框57抗體Human TRXR3(Thioredoxin reductase 3) ELISA Kit人心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)免疫試劑盒
黑曲霉11號(hào)染色體開放閱讀框65抗體Human PARK2(E3 ubiquitin-protein ligase parkin) ELISA Kit人協(xié)同激分子受體(CMR)免疫試劑盒
優(yōu)氈被孔菌11號(hào)染色體開放閱讀框71抗體Human MFN2(Mitofusin-2) ELISA Kit人小而密低密度脂蛋白(sLDL)免疫試劑盒
米根霉11號(hào)染色體開放閱讀框74抗體Human NT-proCNP(N-Terminal Pro-C-Type Natriuretic Peptide) ELISA Kit人小扁豆結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體3(AFP-L3)免疫試劑盒
大豆擬莖點(diǎn)霉12號(hào)染色體開放閱讀框4抗體Human VDAC1(Voltage-dependent anion-selective channel protein 1) ELISA Kit人小扁豆結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體2(AFP-L2)免疫試劑盒
乳桿菌屬12號(hào)染色體開放閱讀框24抗體Human ASMA(Anti Smooth Muscle Antibody) ELISA Kit人小扁豆結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體1(AFP-L1)免疫試劑盒
匍柄霉Stemphylium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BREB病試劑盒根薯內(nèi)酯A
微小桿菌Microvirga│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BREB病試劑盒骨化三
枯草芽孢桿菌Bacillus│subtilis (Ehrenberg) Cohn 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRE3泛蛋白連接TRIM68試劑盒骨化二
明膠液化試驗(yàn)試劑HDL-C(Human High density lipoprotein cholesterol) ELISA Kit 人高密度脂蛋白規(guī)格: 48T
N-MID-OT(Human N-MID Osteocalcin) ELISA Kit 人N端中段骨鈣su規(guī)格: 48T
LRP-6(Human low-density lipoprotein-receptor-related protein) ELISA Kit 人低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白6規(guī)格: 48T
VLDLR(Human very low density lipoprotein receptor) ELISA Kit 人極低密度脂蛋白受體規(guī)格: 48T
LDLR(Human very low density lipoprotein receptor) ELISA Kit 人低密度脂蛋白受體規(guī)格: 48T