DiIC16（3） 高氯酸鹽實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。

服務(wù)流程：
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。

產(chǎn)品名稱	規(guī)格	貨號(hào)
DiIC16(3) 高氯酸鹽	100 mg	FSP189

產(chǎn)品特點(diǎn):
靈敏度高：產(chǎn)品僅用于科研可檢測(cè)個(gè)位拷貝數(shù)的基因
特異性高：有效避免非特異性擴(kuò)增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高：復(fù)孔間差異小，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性強(qiáng)
擴(kuò)增性能優(yōu)：擴(kuò)增效率高，熒光信號(hào)強(qiáng)
?
實(shí)驗(yàn)外包:
1.基因組學(xué)：基因芯片、SNP檢測(cè)、DNA甲基化檢測(cè)、生物信息學(xué)分析
2.轉(zhuǎn)錄組學(xué)：microRNA芯片、LncRNA芯片、表達(dá)譜芯片、RNA-seq
3.蛋白質(zhì)組學(xué)：2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
4.基因檢測(cè)：DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
5.蛋白質(zhì)檢測(cè)：Western blot、Co-ip  EMSA、CHIP、免疫熒光、ELISA
6.病理檢測(cè)：HE染色、特殊染色、組織切片、免疫組化、流式細(xì)胞分選
7.代謝組學(xué)：GC-MS、LC-MS、NMR
8.細(xì)胞及動(dòng)物模型：原代細(xì)胞、細(xì)胞模型、動(dòng)物模型構(gòu)建
?
使用方法：
注：所有試劑使用前需*解凍，混合均勻，6,000rpm離心數(shù)秒后使用。
1.樣本處理（樣本處理區(qū)）
待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動(dòng)化核酸提取儀等，具體提取方法請(qǐng)參照相關(guān)說(shuō)明書(shū)；陽(yáng)性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品無(wú)需提取，可直接使用。
2. 擴(kuò)增試劑準(zhǔn)備（PCR前準(zhǔn)備區(qū)）
取N個(gè)（N=陰性質(zhì)控品+待檢樣本+陽(yáng)性質(zhì)控品）PCR反應(yīng)管，每管分別加入FMD RT-PCR反應(yīng)液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計(jì)算N+1份FMD RT-PCR反應(yīng)液、RT-PCR酶所需總量，兩者混勻離心后分裝20 μl至單個(gè)PCR反應(yīng)管)。
組分每頭份用量FMD  RT-PCR反應(yīng)液19 μlRT-PCR酶。
1 .將所有PCR反應(yīng)管于6,000rpm離心30s，轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。
2.加樣（樣本處理區(qū)）
3.在上述的PCR反應(yīng)管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質(zhì)控品和陽(yáng)性質(zhì)控品各5 μl，蓋緊管蓋，于6,000rpm離心10s，轉(zhuǎn)移至擴(kuò)增區(qū)。
甘油激酶價(jià)格Phospho-LKB1 (Thr189) Antibody100µl

磷酸丙糖異構(gòu)酶使用說(shuō)明書(shū)CBX4 (E6L7X) Rabbit mAb100 ul

單寧酶實(shí)驗(yàn)步驟Phospho-LKB1 (Ser334) Antibody100 ul

磷酸酶B（兔?。﹥r(jià)格Phospho-EGF Receptor (Thr669) Antibody100 ul

對(duì)硝基基-β-D-吡喃葡萄糖苷保存NEK7 (C34C3) Rabbit mAb20 ul

油紅O價(jià)格NEK7 (C34C3) Rabbit mAb100 ul

阿爾新藍(lán)8GX價(jià)格HSPB8/HSP22 Antibody100 ul

3,3-二氨基聯(lián)四鹽酸鹽無(wú)水物價(jià)格Phospho-Na300 ul

堿藍(lán)6B保存Phospho-PDK1 (Ser241) Antibody100 ul

隱色孔雀石綠保存Phospho-PDK1 (Ser241) Antibody100 ul

氯化血紅素價(jià)格PDK1 Antibody20 ul

亞硝基紅鹽實(shí)驗(yàn)步驟PDK1 Antibody100µl

衛(wèi)矛醇保存Phospho-ATR (Thr1989) (D5K8W) Rabbit mAb100 ul

D-葡萄糖酸溶液價(jià)格Akt2 (D6G4) Rabbit mAb20 ul

1,6-二磷酸果糖二鈣鹽價(jià)格Akt2 (D6G4) Rabbit mAb100 ul

海藻酸鈣保存Phospho-IRS-1 (Tyr1222) Antibody100 ul

正磷酸〖鐵〗二水物使用說(shuō)明書(shū)TrkA (D7U3A) Rabbit mAb100 ul
DiIC16(3) 高氯酸鹽Tricholoma│matsutake (S. Ito & S. Imai) Singer分離基物: 菌褶斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 150生長(zhǎng)條件: 22存儲(chǔ)條件: 定期移植法

Vibrio│alginolyticus凍干物；凍結(jié)物模式菌株: no培養(yǎng)基: 820生長(zhǎng)條件: 22℃存儲(chǔ)條件: -80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

Pichia│pastoris斜面培養(yǎng)物；凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 教學(xué)培養(yǎng)基: 14生長(zhǎng)條件: 28℃存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法

Streptomyces│lavendulae subsp. Grasserius凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 培養(yǎng)基：NH4Cl 0.535g;KH2PO4 0.054g;KCl 0.074g;MgSO4.7H2O 0.049g;CaCl2.2H2O 0.147g;NaCl 0.584g;0.05%甲酚紅溶液 1ml;微量元素液 1ml;PH7.0-8.0，適7.8，用0.5gCaCO3或11.9gHEPES調(diào)；瓊脂 20g培養(yǎng)基: A3生長(zhǎng)條件: 37℃存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法

Rhizobium│sp.分離基物: 野青樹(shù)（俗稱：假藍(lán)定）根瘤斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 固氮培養(yǎng)基: 63生長(zhǎng)條件: 28-30存儲(chǔ)條件: 定期移植法

Devosia│chinhatensis分離基物: 土壤凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 832生長(zhǎng)條件: 30℃存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法

Saccharomyces│cerevisiae斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 以糖蜜為原料發(fā)酵酒精。培養(yǎng)基: CM0077生長(zhǎng)條件: 28-30℃存儲(chǔ)條件: 定期移植法

Pseudomonas│sp.凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0002生長(zhǎng)條件: 30℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

Salmonella│sp.分離基物: 雞肛門(mén)拭子斜面培養(yǎng)物；凍干物安全等級(jí): 2模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 流行病學(xué)調(diào)查和細(xì)菌耐藥性檢測(cè)培養(yǎng)基: 2生長(zhǎng)條件: 37℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法
熒光定量PCR原理：
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR，后來(lái)也叫Real-Time PCR，是美國(guó)PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來(lái)的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來(lái)實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì)，熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過(guò)一個(gè)循環(huán)，收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào)，這樣我們就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。
一般而言，熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段：熒光背景信號(hào)階段，熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒(méi)有線性關(guān)系，根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段， PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系，我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便，在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。