詳細介紹
抗體的制備過程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物:常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經除菌并添加防腐劑。
產品名稱 | 鈉鉀ATP酶蛋白a1抗體 |
英文名稱 | ATP1A1 |
規(guī)格 | 0.2ml |
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公司專業(yè)供應的抗體,抗體是用于化學反應、分析化驗、研究實驗、教學實驗、化學配方使用的純凈化學品,產品品質,價格實惠,多種規(guī)格供應,售后完善??贵w的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定
得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存
建議將抗體分裝后進行保存??贵w一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經除菌并添加防腐劑。
抗體分子標記技術:
(一)原理
當應用化學氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團進行鹵化反應。蛋白質分子可進行鹵化反應的基團主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進行化。在應用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發(fā)性的有機溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質液加入包被好的試管中,反應完成即將混合液移入他管終止反應。
(二)準備
1.試劑
經親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鮮制備的含2mg/m1絡胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應終止緩沖液;
2.儀器
凝膠過濾柱;¥-記數(shù)器;玻璃纖維濾。
(三)操作要點
1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行;
2.如果氧化反應損傷蛋白質,可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標記的抗體,在制備后六周內均可使用(1251的半衰期為59.6天);
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結合位點有干擾,因此降低其結合能力,但這種情況很少見。
抗體制備過程:
1.材料與試劑
a.提取的動物 Ig
b.弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑
c.青霉素和鏈霉素
d.實驗動物 兔
e.其它材料及試劑
2、選擇實驗活體。
3、進行動物免疫實驗。
4、試取血樣進行測試,查看免疫效果。
5、如果免疫成功,殺死實驗活體,采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。胎牛血清(無菌采制)
米氏需鹽桿菌 Salegentibacter mishustinae
維多利亞港革蘭氏菌 Gramella portivictoriae
馬胃葡萄球菌 Staphylococcus equorum
狹小發(fā)光桿菌 Photobacterium angustum
動性球菌 Placoccus sp.
闊海褐黃海水菌 Fulvimarina pelagi
棲海膽革蘭氏菌 Gramella echinicola
緩慢油螺旋菌 Oleispira lenta
反硝化玫瑰桿菌 Roseobacter denitrificans
柔軟亞硫酸鹽桿菌 Sulfitobacter delicatus
鈣離子轉運ATP酶B2(ATP2B2)ELISA Kit for ATPase, Ca++ Transporting, Plasma Membrane 2 (ATP2B2)規(guī)格:48T/96T
胰島素樣蛋白5(INSL5)ELISA Kit for Insulin Like Protein 5 (INSL5)規(guī)格:48T/96T
骨骼肌特異性受體酪激酶(MUSK)ELISA Kit for Muscle, Skeletal, Receptor Tyrosine Kinase (MUSK)規(guī)格:48T/96T
肌紅蛋白(MYO)ELISA Kit for Myoglobin (MYO)規(guī)格:48T/96T
沉默調節(jié)蛋白1(SIRT1)ELISA Kit for Sirtuin 1 (SIRT1)規(guī)格:48T/96T
62kDa核孔蛋白(NUP62)ELISA Kit for Nucleoporin 62kDa (NUP62)規(guī)格:48T/96T
白介素18結合蛋白(IL18BP)ELISA Kit for Interleukin 18 Binding Protein (IL18BP)規(guī)格:48T/96T
成纖維細胞生長因子15(FGF15)ELISA Kit for Fibroblast Growth Factor 15 (FGF15)規(guī)格:48T/96T
中性鞘磷酶(NSMASE)ELISA Kit for Neutral Sphingomyelinase (NSMASE)規(guī)格:48T/96T
分泌跨膜蛋白1(SECTM1)ELISA Kit for Secreted And Transmembrane Protein 1 (SECTM1)規(guī)格:48T/96T
血小板衍生生長因子C(PDGFC)ELISA Kit for Plaet Derived Growth Factor C (PDGFC)規(guī)格:48T/96T
中間α-球蛋白抑制因子H2(ITIH2)ELISA Kit for Inter Alpha-Globulin Inhibitor H2 (ITIH2)規(guī)格:48T/96T
鈉鉀ATP酶蛋白a1抗體Pseudoalteromonas aliena分離基物: 水樣/上層海水提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no應用領域: 微生物/耐冷菌培養(yǎng)基: 471生長條件: 15℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
Rubulavirus Newcastle disease virus分離基物: 病雞提供形式: 凍干物安全等級: 2模式菌株: no培養(yǎng)基: 0生長條件: 37存儲條件: 真空冷凍干燥法;
球團產色鏈霉菌種屬: Streptomyces glomerochromogenes提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: yes應用領域: 模式菌株培養(yǎng)基: 0329生長條件: 28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
問號狀鉤端螺旋體種屬: Leptospira interrogans提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 2模式菌株: no應用領域: 血清學分型 Ballum guangdong培養(yǎng)基: CM0114生長條件: 37℃存儲條件: -80℃冰箱凍結法
Bacillus sp.分離基物: 油泥提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0002生長條件: 30℃存儲條件: 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
Sclerotium sp.分離基物: 人字木植物組織提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 藥用植物內生菌培養(yǎng)基: CM0027生長條件: 28C存儲條件: -80℃冰箱凍結
Gibberla sp.分離基物: 發(fā)霉地瓜提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 14生長條件: 30℃存儲條件: -80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
Monascus fuliginoscus提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 發(fā)酵紅曲培養(yǎng)基: CM0013生長條件: 30-32℃存儲條件: 真空冷凍干燥法;定期移植法
Rhizobium sp.(Oxysma esculentum)分離基物: 根瘤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 固氮。培養(yǎng)基: 63生長條件: 28-30存儲條件: 定期移植法