內(nèi)源性酶抑制劑公司正在銷(xiāo)售的產(chǎn)品：人內(nèi)皮型一氧化氮合酶(NOS3/eNOS)試劑盒Anti-MARCKS Antibody柯薩奇病 IgG Ⅰ(間接法二步法)
人凝血因子VII(F7)試劑盒 Anti-MARK1 Antibody柯薩奇病 IgM Ⅰ(間接法二步法)
人凝血因子IX(F9)試劑盒Anti-MARK3 Antibody柯薩奇病 IgG Ⅱ(間接法二步法)
人凝血因子X(jué)(F10)試劑

公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、易保存等特點(diǎn)，咨詢(xún)并訂購(gòu)！

產(chǎn)品分類(lèi)：免疫組化

儲(chǔ)存條件：室溫,12個(gè)月

用途：冰凍切片時(shí),抑制內(nèi)源性酶(過(guò)氧化物酶)

注意事項(xiàng)：主要由抑制劑、防腐劑、PBS配制。

 

 

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱(chēng)量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來(lái)水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱(chēng)量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱(chēng)取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線(xiàn)，搖勻。

 

 

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性

2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量，加無(wú)水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測(cè)器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來(lái)，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過(guò)2.0%，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

艾登短芽孢桿菌半乳糖神經(jīng)?？贵wHuman XPA ELISA Kit雞白介8(IL-8)免疫試劑盒

節(jié)桿菌磷化葡萄糖合成1抗體Human YEATS2 ELISA Kit雞白介6受體(IL-6R)免疫試劑盒

雷州灣芽孢桿菌半乳糖凝集3抗體Human XPNPEP1 ELISA Kit雞白介6(IL-6)免疫試劑盒

亮白曲霉生長(zhǎng)因子受體結(jié)合蛋白7抗體Human YOD1 ELISA Kit雞白介4(IL-4)免疫試劑盒

鞘單胞菌屬糖基轉(zhuǎn)移1結(jié)構(gòu)域1抗體Human YES1 ELISA Kit雞白介3(IL-3)免疫試劑盒

變異居白蟻菌G蛋白偶聯(lián)受體LGR7蛋白抗體Human XRCC5/Ku80(X-ray repair cross-complementing protein 5) ELISA Kit雞白介2(IL-2)免疫試劑盒

干酪乳桿菌G蛋白偶聯(lián)受體MRGX2蛋白抗體Human XRCC4 ELISA Kit雞白介1β(IL-1β)免疫試劑盒

少根根霉東京變種G蛋白偶聯(lián)受體RDC1蛋白抗體Human XRCC2 ELISA Kit雞白介18(IL-18)免疫試劑盒

類(lèi)阿達(dá)青霉G蛋白偶聯(lián)受體TAS1R1蛋白抗體Human PDE1C(Calcium/calmodulin-dependent 3′,5′-cyclic nucleotide phosphodiesterase 1C) ELISA Kit雞白介17(IL-17)免疫試劑盒

膠孢G蛋白偶聯(lián)受體TGR7蛋白抗體Human XIAP(X-linked inhibitor of apoptosis ) ELISA Kit雞白介15(IL-15)免疫試劑盒

田菁根瘤菌G蛋白偶聯(lián)受體GPR157蛋白抗體Human XRN1 ELISA Kit雞白介12(IL-12/70)免疫試劑盒

橙黃色擲孢酵母G蛋白偶聯(lián)受體GPR176蛋白抗體Human XRN2 ELISA Kit雞白介10(IL-10)免疫試劑盒

嗜糖黃桿菌G蛋白偶聯(lián)受體GPR10蛋白抗體Human MTF1(Metal regulatory transcription factor 1) ELISA Kit雞白介1(IL-1)免疫試劑盒

皺褶假絲酵母G蛋白偶聯(lián)受體C5L2蛋白抗體Human XIRP2 ELISA Kit雞γ干擾(IFN-γ)免疫試劑盒

托魯斯山鏈霉菌G蛋白偶聯(lián)受體EX33蛋白抗體Human XYLT1 ELISA Kit雞β內(nèi)酰(β-lactamase)免疫試劑盒

鏈卵菌屬G蛋白偶聯(lián)受體GPR102蛋白抗體Human YME1L1 ELISA Kit雞β干擾(IFN-β/IFNB)免疫試劑盒

乳乳球菌乳亞種Lactococcus│lactis subsp. lactis 質(zhì)量規(guī)格：Viscosity Grade 10010-去乙酰紫杉;7-表-去乙?；仙?/span>

黃海芽孢桿菌Bacillus│marisflavi 質(zhì)量規(guī)格：Viscosity Grade 150多烯紫杉

球形賴(lài)芽孢桿菌Lysinibacillus│sphaericus 質(zhì)量規(guī)格：0.97三尖杉寧堿
內(nèi)源性酶抑制劑D-LDH ELISA Kit   大鼠D-乳suan脫氫mei規(guī)格： 48T

TARC/CCL17 ELISA Kit  大鼠胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子規(guī)格： 48T

CH ELISA Kit  大鼠規(guī)格： 48T

TG ELISA Kit  大鼠甘油三酯規(guī)格： 48T

TG ELISA Kit(human)  人甘油三酯規(guī)格： 48T

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型，培養(yǎng)基，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過(guò)建立殺滅曲線(xiàn)（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線(xiàn)，來(lái)確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線(xiàn)的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過(guò)建立殺滅曲線(xiàn)（劑量反應(yīng)曲線(xiàn)）來(lái)實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過(guò)夜；注：對(duì)于需要更高密度來(lái)檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來(lái)每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來(lái)傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過(guò)于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過(guò)25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克隆（集落）的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類(lèi)型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。