詳細介紹
抗體的制備過程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物:常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
產(chǎn)品名稱 | Rho GTP酶激活蛋白32抗體 |
英文名稱 | ARHGAP32 |
規(guī)格 | 0.2ml |
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公司專業(yè)供應(yīng)的抗體,抗體是用于化學反應(yīng)、分析化驗、研究實驗、教學實驗、化學配方使用的純凈化學品,產(chǎn)品品質(zhì),價格實惠,多種規(guī)格供應(yīng),售后完善。抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定
得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存
建議將抗體分裝后進行保存??贵w一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
抗體分子標記技術(shù):
(一)原理
當應(yīng)用化學氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團進行鹵化反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子可進行鹵化反應(yīng)的基團主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進行化。在應(yīng)用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發(fā)性的有機溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應(yīng)完成即將混合液移入他管終止反應(yīng)。
(二)準備
1.試劑
經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鮮制備的含2mg/m1絡(luò)胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應(yīng)終止緩沖液;
2.儀器
凝膠過濾柱;¥-記數(shù)器;玻璃纖維濾。
(三)操作要點
1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行;
2.如果氧化反應(yīng)損傷蛋白質(zhì),可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天);
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結(jié)合位點有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見。
抗體制備過程:
1.材料與試劑
a.提取的動物 Ig
b.弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑
c.青霉素和鏈霉素
d.實驗動物 兔
e.其它材料及試劑
2、選擇實驗活體。
3、進行動物免疫實驗。
4、試取血樣進行測試,查看免疫效果。
5、如果免疫成功,殺死實驗活體,采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。胎牛血清(無菌采制)
萘法唑鹽鹽標準品Rat pregnancy associated plasma protein-A ELISA Kit純度:0.999
近紅外系統(tǒng)適用性參考標準標準品Rat pregnancy associated plasma protein-A ELISA Kit純度:100μg/mL
n-去甲基阿奇霉素標準品Rat Heat Shock Protein 90 ELISA Kit純度:0.999
那格列奈相關(guān)物質(zhì)A標準品Rat Heat Shock Protein 90 ELISA Kit純度:0.994
那格列奈標準品Rat Heat Shock Protein 70 ELISA Kit純度:0.98
納他霉素標準品Rat Heat Shock Protein 70 ELISA Kit純度:0.98
那拉曲坦混合物標準品Rat heat shock protein 60 ELISA Kit純度:0.995
Chicken Interferon α,IFN-α ELISA Kit雞α干擾素(IFN-α)ELISA試劑盒 進口/分裝規(guī)格:96T/48T130303-200614效價測定霉素規(guī)格:100mg
Chicken Interleukin 18,IL-18 ELISA Kit雞白介素18(IL-18)ELISA試劑盒 進口/原裝規(guī)格:96T/48T130305-200720效價測定土霉素規(guī)格:200mg
Chicken Interleukin 1,IL-1 ELISA Kit雞白介素1(IL-1)ELISA試劑盒 *規(guī)格:96T/48T130306-200918效價測定四環(huán)素規(guī)格:200mg
Chicken virus enteritis,DEV ELISA Kit雞病毒性腸炎病毒(DEV)ELISA試劑盒 *規(guī)格:96T/48T130307-200716效價測定紅霉素規(guī)格:200mg
Chicken Myoglobin,MYO/MB ELISA Kit 雞肌紅蛋白(MYO/MB) ELISA試劑盒進口/分裝規(guī)格:96T/48T130308-200713效價測定鏈霉素規(guī)格:200mg
Chicken Interleukin 9,IL-9 ELISA Kit 雞白介素9(IL-9)ELISA試劑盒進口/原裝規(guī)格:96T/48T130309-200811效價測定新霉素規(guī)格:200mg
Rho GTP酶激活蛋白32抗體Escherichia coli分離基物: 腸內(nèi)容物提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 用于科研培養(yǎng)基: 335生長條件: 37存儲條件: 真空冷凍干燥法;
Streptomyces sp.分離基物: 表提供形式: 其他安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 12生長條件: 28℃存儲條件: 其他
Halomonas axialensis分離基物: 水樣/表層海水提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 微生物/耐冷菌培養(yǎng)基: 471生長條件: 15℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Trichoderma koningii提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 分解纖維素培養(yǎng)基: 0014生長條件: 25-28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Rhizopus stolonifer提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0014生長條件: 25-28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Glomerla cingulata (Stoneman) Spauld. & H. Schrenk分離基物: 萱草葉片提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 14生長條件: 26--30存儲條件: 定期移植法
Bacillus sp.分離基物: 沉積物/深海沉積物提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 無機污染物抗性菌/抗二價錳Mn;產(chǎn)酶微生物/纖維素酶,甘露聚糖酶 產(chǎn)酶微生物/ 蛋白酶、脂酶(三丁酸甘油酯)、纖維素酶培養(yǎng)基: 472生長條件: 28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Hicobacter pylori分離基物: CCSmg17感染沙鼠的胃標本提供形式: 凍結(jié)物安全等級: 2模式菌株: no培養(yǎng)基: CM0021生長條件: 37℃存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié)法
Brevibacillus borsensis分離基物: 土樣提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 33生長條件: 37℃存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法;其他