試劑的組成和配制:
酸性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;堿性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;試劑一:液體10 mL×1瓶,4℃保存;試劑二:液體3 mL×1瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1瓶,-20 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑四:粉劑×1瓶,4 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑五:液體3.6mL×1瓶,4 ℃保存;試劑六:液體30mL×1瓶,4 ℃保存;試劑七:液體50mL×1瓶,4 ℃保存。
自備儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
商品介紹:
測(cè)定意義: 天冬酰胺合成酶是廣泛存在于生物體內(nèi)的一類氨基轉(zhuǎn)移酶,催化谷氨酞胺的氨基向天冬氨酸轉(zhuǎn)移。當(dāng)植物處于氨毒時(shí)天冬酞胺的形成是一種解毒反應(yīng)。 測(cè)定原理: AS催化L-天冬酰胺水解成L-天冬氨酸和氨,利用奈氏試劑檢測(cè)氨增加的速率,即可計(jì)算其酶活性。 |
商品屬性:
NAD+和NADH的提?。?/span>
1、血清(漿)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml酸性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml堿性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 2、組織中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中和, 混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 3、細(xì)胞或細(xì)菌中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):酸性 提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml酸性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):堿 性提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml堿性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 |
ADH測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2?!鰽空白管=A1-A2。。
4. 測(cè)定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A3和A4?!鰽測(cè)定管=A3-A4。
注意:空白管只需測(cè)定一次。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。
咪唑(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Minocycline hydrochlorideCUE結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體包裝1g
尼考(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Mitoxantrone HCl線粒體復(fù)合物NDUFS1蛋白抗體包裝5g
比洛芬(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Mitoxantrone HCl血栓合成抗體包裝1g
達(dá)賓(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Mitoxantrone HCl多癌基因下調(diào)蛋白抗體包裝250mg
伐他鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Mizoribine色C氧化蛋白5B抗體包裝1ml
芬那,滅(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Moguisteine色C氧化亞基3抗體包裝1g
喹(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Moguisteine色C氧化亞基6B抗體包裝250mg
康唑(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Mometasone furoate磷化致癌基因C-Myc抗體包裝100g
喹(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Mometasone furoate磷化致癌基因C-Myc抗體包裝25g
西林鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Natamycin,Pimaricin色P450 11B1抗體包裝5g
羅沙星(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Natamycin,Pimaricin環(huán)磷鳥苷抗體包裝100g
馬西尼/馬澤尼(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Nifedipine內(nèi)皮因子維生B12受體抗體包裝25g
尼(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Nifedipine原癌基因cMAF抗體包裝5g
尼辛葡(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Nimodipine18號(hào)染色體開放閱讀框56抗體包裝1g
,5-脲嘧啶,5-(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Nimodipine3號(hào)染色體開放閱讀框22抗體包裝25g
毛殼菌屬Chaetomium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%信號(hào)傳導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子4試劑盒環(huán)戊烯二;Linderone
黑曲霉Aspergillus│niger 質(zhì)量規(guī)格:≥98%,培養(yǎng)級(jí)信號(hào)傳導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子3試劑盒無(wú)梗五加苷B;Eleutheroside
短小芽孢桿菌Bacillus│pumilus 質(zhì)量規(guī)格:≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品信號(hào)傳導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子2試劑盒偽金絲桃;Pseudohyperici
天冬酰胺合成酶(AS)測(cè)試盒100管/96樣發(fā)酵成對(duì)桿 5-氨磺?;?2-甲氧基蛋白 DJ-1Elisa
節(jié)桿 1-(嘧啶-2-基)-1H-類缺陷病抗體Elisa
酮叢毛單胞 1,3-二溴-2,2-二甲氧基烷神經(jīng)源性絲蛋白抑制劑Elisa
香氣紅冬孢鎖擲孢酵母 5,5-二甲氧基-1,2,3,4-四環(huán)戊二烯β內(nèi)啡肽受體Elisa
檸檬原小單孢 4-甲氧基間苯二甲酸kappa型受體Elisa
牛肝 N-甲基四氫-2H-吡喃-4-二氫還原Elisa
大腸埃希氏桿 2-溴-3',5'-二氟苯乙酮蛋白激GElisa
釀酒酵母 4-(2-羥基乙氧基)苯甲Ⅱ型膠原螺旋肽Elisa
布氏白僵(卵孢白僵) 3-(4-甲氧基苯基)-3-氧代酸甲酯五型腺病抗體Elisa
腸產(chǎn)性大腸埃希氏 3,4,5-三氟苯乙分泌性白蛋白抑制因子Elisa
谷棒桿 3,4,5-三氟苯乙酮麥溶蛋白Elisa
云芝栓孔 (變色栓) 3,5-二氟芐抗乙糖苷甘露糖抗體Elisa
枯草芽孢桿 3-溴-4-甲氧苯抗細(xì)鞭毛蛋白抗體Elisa
芹側(cè)耳(杏鮑菇) 吡咯-2-羧酸乙酯8-羥基鳥糖苷1Elisa
巨型艾耳球蟲 (S)-3-甲基-1-[2-(1-基)苯基]丁.N-乙酰-L-谷鹽抗Chitobioside糖IgA抗體Elisa