商品屬性:
商品介紹:
測(cè)定意義 肝酯酶是脂肪分解酶,在肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞中合成,存在于肝臟竇周間隙內(nèi)皮細(xì)胞表面和竇周間隙腔面的肝細(xì)胞微絨毛表面,可促進(jìn)脂蛋白中的膽固醇向類(lèi)固醇激素轉(zhuǎn)化,血漿中的HL活性增高時(shí),血漿中小顆粒可導(dǎo)致LDL水平升高,加速動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生。 測(cè)定原理 肝酯酶水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生α-萘酚,可與固藍(lán)B鹽形成紫紅色偶氮化合物,在595nm有特征吸收峰,顏色深淺在一定范圍內(nèi)與肝酯酶活性成正相關(guān)。 自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器 天平、冷凍離心機(jī)、研缽、水浴鍋、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1 mL玻璃比色皿。 |
試劑的組成和配制:
酸性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;堿性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;試劑一:液體10 mL×1瓶,4℃保存;試劑二:液體3 mL×1瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1瓶,-20 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑四:粉劑×1瓶,4 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑五:液體3.6mL×1瓶,4 ℃保存;試劑六:液體30mL×1瓶,4 ℃保存;試劑七:液體50mL×1瓶,4 ℃保存。
自備儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
NAD+和NADH的提取:
1、血清(漿)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml酸性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml堿性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 2、組織中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提取:按照組織質(zhì)量(g):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中和, 混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 3、細(xì)胞或細(xì)菌中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提取:先收集細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):酸性 提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml酸性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提取:先收集細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):堿 性提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml堿性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 |
ADH測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2。△A空白管=A1-A2。。
4. 測(cè)定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A3和A4?!鰽測(cè)定管=A3-A4。
注意:空白管只需測(cè)定一次。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。
石吊蘭英文名: D-Mannose神經(jīng)生長(zhǎng)相關(guān)蛋白43包裝1g
石斛(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: N-Octanoyl-N-methylglucamine3-磷甘油脫氫(兔來(lái)源免疫組化用抗體)包裝5g
石斛堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: N-Decanoyl-N-methylglucamine 3-磷甘油脫氫單克抗體(內(nèi)參抗體)包裝1g
石見(jiàn)穿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: n-Octyl-β-D-Thioglucopyranoside生長(zhǎng)停滯特異性蛋白2家族1抗體包裝5g
石椒草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: D(+)-Raffinose pentahydrateG蛋白偶聯(lián)受體97抗體包裝1g
石榴皮(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: D-SorbitolG蛋白結(jié)合蛋白7抗體包裝250mg
石榴皮鞣;安石榴林(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: N-Octyl-β-D-glucopyranoside綠色熒光蛋白抗體包裝25g
石榴子(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: L-(+)-Ribose綠色熒光蛋白抗體包裝5g
石杉?jí)A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: L-(+)-RiboseG蛋白通路抑制蛋白1抗體包裝1g
矢車(chē)菊-3-O-葡萄糖苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: 2-Deoxy-L-ribose膠質(zhì)系源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體α2抗體包裝5g
使君子(使君子仁)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: 4-Methylumbelliferyl-β-D-xylopyranoside Printable Reviews核突觸蛋白-γ抗體包裝1g
首烏藤(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: 2-Deoxy-D-Ribose粒-巨噬克激因子抗體包裝5g
熟地黃(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: D-Galactose還原抗體包裝5ml
鼠尾草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: D-Galactose胰高血糖樣肽-1抗體包裝1g
鼠尾草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Hydrazine dihydrochloride顆粒蛋白前體抗體包裝25g
繩索狀芽孢桿菌Bacillus│funiculus 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR內(nèi)皮2試劑盒絡(luò)石苷;Tracheloside
魯氏不動(dòng)桿菌Acinetobacter│lwoffii 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>95%,標(biāo)準(zhǔn)品內(nèi)皮1受體試劑盒莨菪堿;L-Hyoscyamine
日本慢生根瘤菌Bradyrhizobium│japonicum 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR內(nèi)皮1試劑盒鐮葉芹二;Falcarindiol
肝脂酶(HL)測(cè)試盒50管/24樣Fusarium venenatum Nirenberg N-乙烯基吡咯烷酮肌腱蛋白NElisa
短小芽孢桿 2-乙基丁酸肌腱蛋白XElisa
草木樨中華根瘤 trans-N-tert-Butyloxycarbonyl-4-tosyloxy-L-proline神經(jīng)生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)蛋白BElisa
光滑青霉 六Taperin蛋白Elisa
蜂房哈夫尼 2-甲基-3-(三氟甲基)苯甲Talpid3蛋白Elisa
豌豆根瘤 2,5-二氫-6-羥基-2-甲基-5-氧-3-巰基-1,2,4-三新城疫病sIgA抗體Elisa
香菇 5-溴-3-甲幾丁質(zhì)Elisa
孟氏假單胞 4-基苯乙鎖鏈Elisa
麥根腐平臍蠕孢 1-溴-3-苯氧基烷基質(zhì)金屬蛋白抑制因子9Elisa
灰葡萄孢* (1S,2S)-(+)-N,N'-二甲基環(huán)己烷-1,2-二Tsukushin蛋白Elisa
球孢白僵 間苯甲萊姆病抗體Elisa
克魯斯假絲酵母 4,5-二氟-2-萊姆病IgM抗體Elisa
桑炭疽盤(pán) 3-溴-5-氟-4-甲氧基苯高遷移率族AT Hook蛋白2Elisa
乳酸乳球乳亞種 4-乙酰基脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2Elisa
粉擬青霉 3-甲氧基溴芐Notch同源物3Elisa