公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點(diǎn),咨詢并訂購!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
髓鞘染色液 | 3×50ml | FS-R6990 |
產(chǎn)品分類:神經(jīng)染色
儲存條件:室溫,避光,12個(gè)月
用途:髓鞘染色,石蠟切片
注意事項(xiàng):染色結(jié)果為:髓鞘呈深綠色,脫髓鞘纖維不著色。
配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理:
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一種白色晶體粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑,基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理:稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層,然后用水洗凈,烘干。
配制步驟:
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自來水、純水洗凈,烘干、冷卻。
2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15~0.2g Zn,蓋好小表面皿。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中,用純水稀釋至標(biāo)線,搖勻。
實(shí)驗(yàn)方法與判定:
1.對照品溶液的穩(wěn)定性
2.對照品溶液的配制:精密量取腦對照品適量,加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,作為對照品溶液。
3.色譜條件:以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱;柱溫120℃;進(jìn)樣口溫度250℃;檢測器溫度250℃;分流進(jìn)樣,分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。
4.實(shí)驗(yàn)方法:配制的對照品溶液,一份置冷處保存,一份置室溫中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液,三種儲備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,并依據(jù)新對照品的峰面積計(jì)算原對照品溶液的含量。記錄下來,保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%,驗(yàn)證對照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。
短小芽孢桿菌9號染色體開放閱讀框91抗體Human FBXW4(F-box and WD repeat domain containing 4) ELISA Kit兔子載脂蛋白B48(apo-B48)免疫試劑盒
Vagococcus sp.9號染色體開放閱讀框93抗體Human FBXO18 ELISA Kit兔子孕激/孕(PROG)免疫試劑盒
楊樹細(xì)盾霉9號染色體開放閱讀框96抗體Human FBXW5 ELISA Kit兔子游離脂肪(FFA)免疫試劑盒
假單胞菌9號染色體開放閱讀框98抗體Human FBXW7 ELISA Kit兔子硬骨(SOST)免疫試劑盒
竹蓀屬分裂周期蛋白5樣蛋白抗體Human FBXO22 ELISA Kit兔子胰高血糖(GC)免疫試劑盒
球孢白僵菌鈣粘蛋白23抗體Human FCHSD1 ELISA Kit兔子胰島樣生長因子2(IGF-2)免疫試劑盒
松生擬層孔菌色p450 2s1抗體Human FCRLB ELISA Kit兔子胰島樣生長因子1(IGF-1)免疫試劑盒
香菇7角蛋白16抗體Human FBXO28 ELISA Kit兔子胰島(INS)免疫試劑盒
簡青霉半胱蛋白蛋白-6抗體Human FMNL1 ELISA Kit兔子氧化低密度脂蛋白(OxLDL)免疫試劑盒
土生叢毛單胞菌c-fos抗體Human FMR1NB ELISA Kit兔子血小板因子4(PF-4/CXCL4)免疫試劑盒
暗產(chǎn)色鏈霉菌9號染色體開放閱讀框23抗體Human FKBP6 ELISA Kit兔子血小板衍生生長因子AB(PDGF-AB)免疫試劑盒
扁菌9號染色體開放閱讀框25抗體Human FKBP3 ELISA Kit兔子血小板衍生生長因子AA(PDGF-AA)免疫試劑盒
靈芝屬9號染色體開放閱讀框30抗體Human FKBP7 ELISA Kit兔子血小板活化因子(PAF)免疫試劑盒
里亞氏須腹菌9號染色體開放閱讀框37抗體Human FKBP2 ELISA Kit兔子血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)免疫試劑盒
Pedobacter9號染色體開放閱讀框40抗體Human FKBP9 ELISA Kit兔子血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)免疫試劑盒
大腸埃希氏菌9號染色體開放閱讀框41抗體Human FBXO3 ELISA Kit兔子血管緊張1-7(Ang1-7)免疫試劑盒
綠產(chǎn)色鏈霉菌Streptomyces│viridochromogenes 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRv-rel禽網(wǎng)狀內(nèi)皮過多癥病癌基因同源物B試劑盒霹靂蘿芙木堿
越南芽孢桿菌Bacillus│vietnamensis 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRvav3鳥核苷交換因子試劑盒蒲公英賽
小單孢菌屬Micromonospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BRU型肌激,線粒體試劑盒哌異黃
髓鞘染色液RV Ag(Human Rotavirus antigen) ELISA Kit 人輪狀病毒抗原規(guī)格: 48T
LP Ag(Human Legionella pneumophila antigen) ELISA Kit 人軍團(tuán)jun抗原規(guī)格: 48T
Human colicin ELISA Kit 人大腸junsu規(guī)格: 48T
ADV-Ag(Human Adenovirus Antigen) ELISA Kit 人腺病毒抗原規(guī)格: 48T
Human Trichinella antibody ELISA Kit 人旋毛蟲規(guī)格: 48T
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型,培養(yǎng)基,生長條件和細(xì)胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應(yīng)性曲線,來確定最佳篩選濃度。
一般而言,哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL;細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株,需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度,可通過建立殺滅曲線(劑量反應(yīng)曲線)來實(shí)現(xiàn),至少選擇5個(gè)濃度。
1) 第一天:未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,CO2培養(yǎng)過夜;注:對于需要更高密度來檢測活力的細(xì)胞,可增加接種量。
2) 根據(jù)細(xì)胞類型,設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例,可設(shè)定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。
3) 第二天:替換舊的培養(yǎng)基,換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。
4) 接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10天)內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。
3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選
1) 轉(zhuǎn)染48h后,用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密,其效率會降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3) 篩選7天后觀察并評估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間,這取決于宿主細(xì)胞類型,轉(zhuǎn)染,以及篩選效果。
4) 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。