商品屬性:
商品介紹:
測(cè)定意義: LAP是一類能水解肽鏈N-末端為亮氨酸的酶,廣泛存在于肝、腎、胰等組織中,尤其以肝臟中含量最為豐富。各類肝病患者因肝細(xì)胞損傷,血清LAP的活性均有不同程度的升高,因此,血清LAP活性的檢測(cè)能從不同側(cè)面反映各種肝病的發(fā)生和發(fā)展。 測(cè)定原理: LAP分解L-亮氨酰對(duì)硝基苯胺生成對(duì)硝基苯胺,后者在405nm有最大吸收峰,通過測(cè)定吸光值升高速率來計(jì)算LAP活性。 自備用品: 可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。 |
試劑的組成和配制:
酸性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;堿性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;試劑一:液體10 mL×1瓶,4℃保存;試劑二:液體3 mL×1瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1瓶,-20 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑四:粉劑×1瓶,4 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑五:液體3.6mL×1瓶,4 ℃保存;試劑六:液體30mL×1瓶,4 ℃保存;試劑七:液體50mL×1瓶,4 ℃保存。
自備儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
NAD+和NADH的提?。?/span>
1、血清(漿)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml酸性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml堿性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 2、組織中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中和, 混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 3、細(xì)胞或細(xì)菌中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):酸性 提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml酸性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):堿 性提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml堿性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 |
ADH測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2?!鰽空白管=A1-A2。。
4. 測(cè)定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A3和A4?!鰽測(cè)定管=A3-A4。
注意:空白管只需測(cè)定一次。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。
脲(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Tiotropium bromide hydrate 6號(hào)染色體開放閱讀框222抗體包裝1g
脲雜質(zhì)2(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Amiodarone HCl熱休克蛋白58抗體包裝1g
脲雜質(zhì)Ⅰ/4-[2-(3-乙基-4-基-2-氧...英文名: Amiodarone HCl色C P450 17A1抗體包裝100g
齊特(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Amotriptan malate膜蛋白CLDND1抗體包裝25g
齊特雜質(zhì)Ⅰ/1-(3-氮雜雙環(huán)[3.3.0]辛基)...英文名: Vidarabine/Ara-A二氫嘧啶相關(guān)蛋白1抗體包裝5g
(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Vidarabine/Ara-A霉單克抗體包裝100ml
(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Ampicillin TrihydrateCD98重鏈抗原抗體包裝25ml
庚炔諾(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Ampicillin Trihydrate鈣蛋白抑制蛋白抗體包裝500ml
枸櫞鉍(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Atipamezole HClcGMP依賴性蛋白激1抗體包裝1g
枸櫞己定(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Atipamezole HCl胞漿鈣獨(dú)立磷脂A2抗體包裝100g
枸櫞莫沙比(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Azatadine Maleate1號(hào)染色體開放閱讀框98抗體包裝500g
枸櫞噴妥維林(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Bambuterol HClCOX4NB蛋白抗體包裝1g
枸櫞E-異構(gòu)體英文名: Bambuterol HCl腫瘤/抗原77抗體包裝5g
枸櫞鋅(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Benserazide HClCD81抗體包裝1g
枸櫞奧芬那君;枸芬那君(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Canagliflozin輔Q10B抗體包裝100g
蠕形青霉Penicillium│vermiculatum 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品鋅指蛋白644試劑盒維生B2;Vitamin B2
芽孢桿菌Bacillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,富馬鹽,BR鋅α2糖蛋白試劑盒維生E;Vitamin E
#白色短桿菌Curtobacterium│albidum (Komagata and Iizuka) Yamada and Komagata 質(zhì)量規(guī)格:≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品心型脂肪結(jié)合蛋白試劑盒維生C;Vitamin C
亮氨酸氨基肽酶(LAP)測(cè)試盒50管/48樣普通變形桿 3-基苯酸頻哪酯盤狀結(jié)構(gòu)域受體家族成員1Elisa
橙鱗傘2 正戊基三苯基溴化磷血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體1Elisa
北里胞 5-溴-3--2-甲酸甲酯血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體4Elisa
羊無漿體(青海海宴株) (三苯基亞正膦基)乙視黃Elisa
鮑姆針層孔 (S)-(-)-2-羧基環(huán)丁鱗狀癌相關(guān)抗原2Elisa
枯草芽孢桿 2--6-甲酸神經(jīng)營養(yǎng)受體P75Elisa
鼠李糖乳桿 3-溴苯基硫脲低氧誘導(dǎo)因子1Elisa
棘孢曲霉 4,6-二-5-氟嘧啶精漿彈性硬蛋白Elisa
釀酒酵母 1-芐基-2-羧酸精漿彈性硬蛋白Elisa
類阿達(dá)青霉 4-異硫酸苯酯糖類抗原15-3Elisa
帶小棒鏈霉 2-(3,4-二芐基)苯并咪唑半乳糖苷Elisa
都柏林克羅諾桿都柏林亞種 2,3-二溴-1,4-二半胱氨酰白三烯Elisa
球孢白僵 3-溴-5-氟苯乙DDX4Elisa
Sphingomonas abaci 1-萘乙酸乙酯基膜聚糖;內(nèi)腔蛋白Elisa
大腸埃希 3-羥基己酸甲酯前腎Elisa