試劑的組成和配制:
酸性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;堿性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;試劑一:液體10 mL×1瓶,4℃保存;試劑二:液體3 mL×1瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1瓶,-20 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑四:粉劑×1瓶,4 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑五:液體3.6mL×1瓶,4 ℃保存;試劑六:液體30mL×1瓶,4 ℃保存;試劑七:液體50mL×1瓶,4 ℃保存。
自備儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
商品介紹:
測(cè)定意義: 生物體內(nèi)巰基主要包括非蛋白質(zhì)巰基和蛋白質(zhì)巰基。巰基化合物在體內(nèi)具有重要的解毒功能,對(duì)生物體的自我調(diào)節(jié)具有非常重要的生理意義。 測(cè)定原理: 巰基基團(tuán)與5,5’- 二硫代-雙-硝基苯甲酸(DTNB)反應(yīng),生成黃色化合物,在412nm處有最大吸收峰。 自備實(shí)驗(yàn)用品: 天平、研缽、可見(jiàn)分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、1mL玻璃比色皿和蒸餾水,甲醇。 |
商品屬性:
NAD+和NADH的提?。?/span>
1、血清(漿)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提取:按照血清(漿)體積(ml):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml酸性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml堿性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 2、組織中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提取:按照組織質(zhì)量(g):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中和, 混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 3、細(xì)胞或細(xì)菌中NAD+和NADH的提取: NAD+的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):酸性 提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml酸性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):堿 性提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml堿性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 |
ADH測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2。△A空白管=A1-A2。。
4. 測(cè)定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A3和A4?!鰽測(cè)定管=A3-A4。
注意:空白管只需測(cè)定一次。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。
AV-951英文名: Adenosine磷化鈣調(diào)磷B亞基B1抗體包裝5g
BGJ398(NVP-BGJ398)英文名: Adiphenine HCl羊毛甾14α-去基化蛋白抗體包裝5g
Carmustine(進(jìn)分)英文名: Adiphenine HCl補(bǔ)體C5抗體包裝1g
CEP-18770英文名: Alarelin Acetate5號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框24抗體包裝250mg
HSP990英文名: Alendronate Sodium5號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框42抗體包裝250mg
MK4827 (Niraparib)英文名: Alendronate Sodium5號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框49抗體包裝250mg
O-6-芐基鳥(niǎo)英文名: Allopurinol5號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框35抗體包裝1g
Ruxolitinib(INCB018424) pho...英文名: Allopurinol中心體蛋白192抗體包裝25g
SB431542,SB-431542英文名: Allylestrenol中心體蛋白27抗體包裝5g
TAE684英文名: Allylestrenol中心體蛋白290抗體包裝100g
Tamoxifen Citrate英文名: Alprostadil,PGE1,中心體蛋白63抗體包裝25g
Tariquidar,XR-9576英文名: Altrenogest中心體蛋白70/p10結(jié)合蛋白抗體包裝5g
阿法替尼英文名: Altrenogest中心體蛋白72抗體包裝1ml
阿法替尼雙馬來(lái)鹽英文名: Amantadine HCl中心體蛋白95抗體包裝25g
阿西替尼英文名: Amantadine HCl中心體蛋白89抗體包裝1g
: AS2.606資源名稱: 橢圓釀酒酵母 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR,三合物胰高血糖樣肽1試劑盒異綠原C;Isochlorogenic
豌豆根瘤菌Rhizobium│leguminosarum 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品,三合物胰高血糖試劑盒異綠原B;Isochlorogenic
曼小毛霉原變種Micromucor│ramarnianus 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)≥750IU/MG,BP,BR胰多肽試劑盒異綠原A;Isochlorogenic
非蛋白質(zhì)巰基測(cè)試盒50管/24樣楊奇青霉 1-苯基正癸烷血管生成樣蛋白8Elisa
沙諾氏芽孢桿 3-溴甲酯谷脫羧65抗體Elisa
幼角鐮孢 4-鄰苯二甲酰亞氨基環(huán)己酮谷脫羧65IgG抗體Elisa
黑色附球霉 3,5-二溴-4-硝基吡唑新型隱球抗原Elisa
大腸埃希 薄荷酮, mixture of isomers血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子DElisa
雅致枝霉 2-溴-3-氟三氟甲苯沙眼衣原體IgA抗體Elisa
谷棒桿 (S)-3-氨基四對(duì)甲苯磺酸鹽枸櫞酸Elisa
季也蒙邁耶氏酵母 2-氨基-2,4-二甲酯磷酸二酯9AElisa
大孔 (R)-(+)-alpha-氨基-gamma-丁內(nèi)酯鹽酸鹽耐膽鹽Elisa
嗜麥芽寡養(yǎng)單胞 普羅帕脒整合αMβ2Elisa
黃色糖多孢 N-芐基-雙鄰乙基氨基鹽酸鹽整合αVβ5Elisa
居真細(xì)屬 微管相關(guān)蛋白輕鏈3IIElisa
少根根霉 3,5-二氟-4-甲氧基苯甲甲型肝炎抗原Elisa
纖維單胞 帕米韋三水合物腫瘤蛋白p53Elisa
金黃桿 阿替唑鹽酸鹽氧化低密度脂蛋白IgG抗體Elisa