商品屬性:
商品介紹:
測(cè)定意義細(xì)胞色素P450酶系是一組主要存在于肝臟的同工酶,藥物在動(dòng)物體內(nèi)的I相反應(yīng)主要依賴細(xì)胞色素P450酶系催化完成,許多藥物能誘導(dǎo)或抑制細(xì)胞色素P450系活性,從而引起藥物的療效降低、中毒和殘留發(fā)生率的增加。AH在P450酶系中相當(dāng)于CYP2E1亞型,CYP2E1不僅參與了藥物的代謝,而且還能催化多種前致癌物和前毒物的活化過(guò)程。測(cè)定原理AH催化苯胺羥化后產(chǎn)生的4-氨基酚,進(jìn)一步轉(zhuǎn)變?yōu)榉?吲哚復(fù)合物,該復(fù)合物在630nm處有最大吸收峰。實(shí)驗(yàn)中所需儀器及設(shè)備:可見(jiàn)分光光度計(jì)、普通離心機(jī),低溫超速離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、1ml玻璃比色皿、雙蒸水、甘油和冰。 |
試劑的組成和配制:
酸性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;堿性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;試劑一:液體10 mL×1瓶,4℃保存;試劑二:液體3 mL×1瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1瓶,-20 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑四:粉劑×1瓶,4 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑五:液體3.6mL×1瓶,4 ℃保存;試劑六:液體30mL×1瓶,4 ℃保存;試劑七:液體50mL×1瓶,4 ℃保存。
自備儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
NAD+和NADH的提?。?/span>
1、血清(漿)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提取:按照血清(漿)體積(ml):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml酸性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml堿性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 2、組織中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提取:按照組織質(zhì)量(g):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中和, 混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 3、細(xì)胞或細(xì)菌中NAD+和NADH的提取: NAD+的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):酸性 提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml酸性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):堿 性提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml堿性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 |
ADH測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2?!鰽空白管=A1-A2。。
4. 測(cè)定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A3和A4?!鰽測(cè)定管=A3-A4。
注意:空白管只需測(cè)定一次。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。
異蓮心堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Ethacrynic acidA型流感病-NS1抗體(神經(jīng)1)包裝5g
異綠原A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Maprotiline hydrochloride去腎上腺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白/神經(jīng)遞質(zhì)去腎上腺轉(zhuǎn)運(yùn)體抗體包裝250g
異綠原B(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Hydralazine hydrochloride磷化一氧化氮合成3(內(nèi)皮型)抗體包裝100ml
異綠原C(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Hydroxyzine dihydrochloride新的飽食分子蛋白抗體包裝25ml
異羅漢果皂苷 V英文名: Auranofin脊髓灰質(zhì)炎病受體相關(guān)蛋白4抗體包裝1g
異芒果苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: TERBUTALINE SULFATE性受體NK-p80抗體包裝25g
異牡荊(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: MALTOTRIOSE粘附分子CD112抗體包裝5g
異南五味子木脂寧英文名: Procaterol HCl腎小球粘附分子受體抗體包裝250mg
異歐前胡(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Sodium D-pantothenate 成纖維核受體Nr5a2抗體包裝100g
異皮啶(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Nintedanib (BIBF1120)鈉鈣交換蛋白1抗體包裝25g
異去蟛蜞菊內(nèi)酯英文名: Riboflavin-5-phosphate sodium鈉鈣交換蛋白3抗體包裝5g
異去氫鉤藤堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: D-(+)-Maltose monohydrate 天冬受體抗體包裝25g
異珊瑚菜英文名: Urea磷化核因子2相關(guān)因子2(Ser40)抗體包裝5g
異鼠李(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: D-BiotinNemo樣激抗體包裝25g
異鼠李-3-O-槐二糖-7-O-鼠李糖苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Terfenadine磷化Nemo樣激抗體包裝5g
黑沙假單胞菌Pseudomonas│sabulinigri 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR堿性成纖維生長(zhǎng)因子試劑盒橙皮;Hesperetin
圈卷產(chǎn)色鏈霉菌淺色變種Streptomyces│ansochromogenes var. pallens 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品間皮試劑盒川陳皮;Naringin
地衣芽胞桿菌Bacillus│licheniformis 質(zhì)量規(guī)格:>99%間變性淋巴瘤激試劑盒川續(xù)斷皂苷Ⅵ;Akebia saponi
苯胺4羥化酶(AH)測(cè)試盒50管/24樣橙色桿屬 2-二氟胰高血糖樣肽1Elisa
貝倫格葡萄座腔梨生專(zhuān)化型 4,4'-(1-甲基亞乙基)雙(2-)胰高血糖樣肽2Elisa
豌豆根瘤 5-溴-2-三氟甲基嘧啶胰脂肪Elisa
氧化節(jié)桿 1-乙氧基-4-乙炔基苯乙脫氫Elisa
細(xì)孢毛霉 2-溴-1,3-二苯甲乙二1Elisa
植物乳桿植物亞種 五氟酸乙酯乙脫氫Elisa
吸水鏈霉 1-溴-4-(反式-4-n-戊基環(huán)己基)苯乙酰CoAElisa
pMV306hsp+LuxG13(addgene26161) 4-(3-甲氧基氧基)苯甲乙酰CoA羧化Elisa
豌豆根瘤 異丁酰醋酸甲酯乙酰Elisa
枯草芽孢桿 基環(huán)戊烷乙酰受體抗體Elisa
立枯絲核 (R)-(+)-2-乙酰氧基琥珀酸酐乙酰酯Elisa
多主葡萄殼 2,7-二羥基-9-芴酮乙酰轉(zhuǎn)移Elisa
食鹿角菜假交替單胞 對(duì)十二烷基苯磺酰疊氮乙酰羧化Elisa
番茄枯萎病 1-己基吡啶六氟磷酸鹽乙酰肝Elisa
膠凍樣類(lèi)芽孢桿 左炔諾孕酮乙型肝炎E抗原Elisa