精子活體染色液公司正在銷售的產(chǎn)品：豚鼠前動(dòng)力蛋白2(PK2)試劑盒Anti-MSLN Antibody(0312)磷酸化鋅指蛋白36抗體
豚鼠蕈堿型膽堿受體M2(CHRM2)試劑盒Anti-MST1 Antibody鋅指蛋白347抗體
豚鼠胰島素(INS)試劑盒Anti-MT-CO1 Antibody鋅指蛋白BED5抗體
豚鼠半胱天冬酶1(CASP1)試劑盒Anti-MT-CO1 Antibody

公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點(diǎn)，咨詢并訂購！

產(chǎn)品分類：細(xì)胞染色

儲(chǔ)存條件：室溫,12個(gè)月

用途：評(píng)估精子存活率,鑒別不活動(dòng)精子膜結(jié)構(gòu)和功能的完整性

 

 

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。

 

 

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性

2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測(cè)器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過2.0%，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

南沙參（標(biāo)準(zhǔn)品） Triflumuron磷化GADD153抗體包裝250mg

南山楂（標(biāo)準(zhǔn)品） PencycuronG蛋白αS抗體（鳥核苷結(jié)合蛋白Gα s）包裝1g

南五味子（標(biāo)準(zhǔn)品） Hexythiazox solutionG蛋白β4抗體/鳥核苷結(jié)合蛋白β亞基4包裝250mg

鬧羊花II Hexythiazox solutionG蛋白β2抗體/鳥核苷結(jié)合蛋白β亞基2包裝1g

鬧羊花III Imazalil solutionG蛋白γ2抗體/鳥核苷結(jié)合蛋白γ2抗體包裝5g

鬧羊花V Siduron磷化糖原合激3β抗體包裝100g

鬧洋花（標(biāo)準(zhǔn)品） SimazineG蛋白偶聯(lián)受體GPR92蛋白抗體包裝25g

擬人參皂苷F11(標(biāo)準(zhǔn)品) Simazine solution己糖6磷脫氫抗體包裝500g

擬人參皂苷Rh2(標(biāo)準(zhǔn)品)  Phoxim solutionG蛋白偶聯(lián)受體γ14抗體包裝5g

擬人參皂苷RT5(標(biāo)準(zhǔn)品) Phoxim solution腸高血糖相關(guān)肽抗體包裝100g

鳥苷 Pirimicarb solution葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白10抗體包裝25g

尿囊（標(biāo)準(zhǔn)品） Pyrazosulfuron腸高血糖相關(guān)肽抗體包裝500g

檸檬苦，黃柏內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品,橙皮提取) PretilachlorG蛋白偶聯(lián)受體120抗體包裝1g

檸檬苦；吳茱萸內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品,吳茱萸提取) Pretilachlor solutionG蛋白偶聯(lián)受體40抗體包裝25g

牛白藤（標(biāo)準(zhǔn)品） Propoxur solution20號(hào)染色體開放閱讀框100抗體包裝5g

克魯弗酵母克魯弗變種Saccharomyces│kluyveri var. kluyveri 質(zhì)量規(guī)格：標(biāo)準(zhǔn)品,用于含量測(cè)定皮膚淋巴相關(guān)抗原試劑盒木犀草苷;Cynaroside

枯草芽孢桿菌枯草亞種Bacillus│subtilis subsp. subtilis 質(zhì)量規(guī)格：>99%,JP16皮膚蛋白試劑盒迷迭香;Rosmarinic acid

: Yt17資源名稱: 假絲酵母 質(zhì)量規(guī)格：>98%,USP34,BR,可用于培養(yǎng)皮動(dòng)蛋白試劑盒牡荊;Vitexin
精子活體染色液ompF(putative outer membrane porin F protein)  小腸結(jié)腸炎耶爾森氏jun膜通道蛋白抗原規(guī)格： 0.5mg

OLFM1 peptide  嗅球蛋白1多肽抗原規(guī)格： 0.5ml

ORX-A(orexin-A)  增食欲su-A/欲激suA抗原規(guī)格： 0.5mg

OTR(oxytocin receptor)  縮宮su受體規(guī)格： 0.5mg

OXR (Orexin receptor)  食欲su受體(多肽)規(guī)格： 0.5mg

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜；注：對(duì)于需要更高密度來檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克隆（集落）的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。