商品屬性:
商品介紹:
測(cè)定意義: 多胺氧化酶是催化生物體內(nèi)多胺氧化的關(guān)鍵酶,通過調(diào)節(jié)體內(nèi)多胺水平和生成物的濃度,參與各種植物體對(duì)逆境脅迫的反應(yīng)和生長(zhǎng)發(fā)育過程。 測(cè)定原理: PAO催化多胺氧化產(chǎn)生過氧化氫,在過氧化氫酶存在的條件下與底物顯色,在550nm下有特征吸收峰,通過測(cè)定吸光值增加速率來反映PAO活性。 需自備的儀器和用品: 分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。 |
試劑的組成和配制:
酸性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;堿性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;試劑一:液體10 mL×1瓶,4℃保存;試劑二:液體3 mL×1瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1瓶,-20 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑四:粉劑×1瓶,4 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑五:液體3.6mL×1瓶,4 ℃保存;試劑六:液體30mL×1瓶,4 ℃保存;試劑七:液體50mL×1瓶,4 ℃保存。
自備儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
NAD+和NADH的提?。?/span>
1、血清(漿)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml酸性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml堿性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 2、組織中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提取:按照組織質(zhì)量(g):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中和, 混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 3、細(xì)胞或細(xì)菌中NAD+和NADH的提取: NAD+的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):酸性 提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml酸性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):堿 性提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml堿性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 |
ADH測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2?!鰽空白管=A1-A2。。
4. 測(cè)定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A3和A4?!鰽測(cè)定管=A3-A4。
注意:空白管只需測(cè)定一次。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。
奧沙坦酯英文名: Epirubicin HCl磷化CREB-1抗體包裝5g
倍他洛爾英文名: Eptifibatide Acetate磷化CREB-1抗體包裝1g
磺地平英文名: Erlotinib hcl 磷化周期依賴性激6抗體包裝250mg
達(dá)比加群英文名: Erlotinib hcl 原癌基因CBL2抗體包裝100mg
達(dá)比加群酯英文名: Ertapenem sodium磷化原癌基因CBL2抗體包裝25mg
達(dá)肝/達(dá)替肝鈉英文名: Estradiolβ鏈接相互作用蛋白1抗體包裝25g
丹曲林鈉英文名: Estradiol磷化β鏈接相互作用蛋白1抗體包裝5g
單硝異山梨酯英文名: Estriol磷化β 連環(huán)蛋白抗體包裝1g
英文名: Estriol葉綠體蛋白抗體(植物)包裝1g
洛地平/地平英文名: Etoposide磷化后期促進(jìn)復(fù)合蛋白3抗體包裝5g
伐他鈉英文名: Etoposide磷化絲切蛋白抗體包裝100g
富馬英文名: Etoposide磷化絲切蛋白抗體包裝25g
肝鈉/肝磷脂鈉鹽英文名: Exemestane磷化周期檢測(cè)點(diǎn)激2抗體包裝5g
環(huán)貝特英文名: Exenatide Acetate/Exendin-4磷化分裂周期蛋白25抗體包裝10MG
吉羅齊英文名: Finasteride磷化分裂周期蛋白25抗體包裝1g
米曲霉Aspergillus│oryzae 質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定試劑盒異鼠李;Isorhamnetin
青霉Penicillium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR,USP31一氧化碳試劑盒羽扇豆;Lupeol
彎曲假單胞菌Pseudomonas│geniculata 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品一氧化氮試劑盒異去蟛蜞菊內(nèi)酯;Demethylwed
多胺氧化酶(PAO)測(cè)試盒50管/48樣大腸埃希氏桿 磺噠鼻病Elisa
海神弧 環(huán)氧大豆油Elisa
谷棒桿 高效氟菊酯P22cr蛋白Elisa
茯苓 唑酮鈣蛋白抑Elisa
運(yùn)動(dòng)發(fā)酵單孢* 雄烯二酮鈣蛋白Elisa
短裙竹蓀東北變種* 二十六烷CD10分子Elisa
金黃殼囊孢 環(huán)唑CD26分子Elisa
乳酸桿 托洛爾核轉(zhuǎn)錄因子p50Elisa
長(zhǎng)枝木霉 頭孢呋辛鈉干擾調(diào)節(jié)因子3Elisa
黑平188 己定中性粒透明質(zhì)酸Elisa
淺灰綠色鏈霉 亞麻酸金屬蛋白組織抑制因子Elisa
白肉迷孔 鄰苯二甲酸單(2-乙基己基)酯整合α6Elisa
印度毛殼 芬苯達(dá)唑整合β4Elisa
煙管 2--3-甲基吡整合β5Elisa
蘋果鏈格孢(蘋果斑點(diǎn)落葉?。?/span> 環(huán)吡司整合β3Elisa