磷脂染色液公司正在銷售的產(chǎn)品：雞凝血酶/抗凝血酶復(fù)合物(TAT)試劑盒Anti-CDH26 Antibody角蛋白18(多肽)
雞神經(jīng)生長(zhǎng)因子 (NGF)試劑盒 Anti-CDH4 Antibody角蛋白18多肽抗原
雞平足蛋白(PDPN)試劑盒Anti-CDH7 Antibody角蛋白18抗原（C端）
雞肌腱蛋白C(TNC)試劑盒Anti-CDH6 Antibody角蛋白14抗原
雞周期素依賴

公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、易保存等特點(diǎn)，咨詢并訂購(gòu)！

產(chǎn)品分類：脂類染色

儲(chǔ)存條件：室溫,避光,12個(gè)月

用途：磷脂染色

注意事項(xiàng)：磷脂、神經(jīng)髓鞘磷脂和核蛋白呈藍(lán)黑色,胞質(zhì)呈灰黃色。

 

 

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。

 

 

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性

2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測(cè)器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過2.0%，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

大豆慢生根瘤菌末端補(bǔ)體復(fù)合物抗體Human CCNL1 ELISA Kit山羊白介1β(IL-1β)免疫試劑盒

多殺性巴氏桿菌8號(hào)染色體開放閱讀框55抗體Human CD209 ELISA Kit山羊白介1α(IL-1α)免疫試劑盒

粗柄羊肚菌補(bǔ)體C4a+C4b蛋白抗體Human Cathepsin H ELISA Kit山羊白介18(IL-18)免疫試劑盒

大腸埃希菌CD44V7抗體Human CBP20 (NCBP 20 kDa subunit) ELISA Kit山羊白介12(IL-12/P40)免疫試劑盒

變灰鏈霉菌CD44V10抗體Human CCDC158 (Coiled-coil domain-containing protein 158) ELISA Kit山羊白介10(IL-10)免疫試劑盒

秀珍菇CD44V4抗體Human BTN3A1 (Butyrophilin Subfamily 3 Member A1) ELISA Kit山羊阿黑皮原(POMC)免疫試劑盒

大腸埃希氏菌緊密連接蛋白4抗體Human BBX(HMG box transcription factor BBX) ELISA Kit山羊γ干擾(IFN-γ)免疫試劑盒

盔形畢赤酵母6號(hào)染色體開放閱讀框140抗體Human BTNL2(Butyrophilin-like protein 2) ELISA Kit山羊β-脂蛋白(β-LP)免疫試劑盒

金橫裂鏈霉菌L型鈣通道蛋白抗體Human BCAS1 ELISA Kit山羊β內(nèi)啡肽(β-EP)免疫試劑盒

乳明串珠菌電壓依賴性鈣通道Cav3.1抗體Human BTNL8 ( Butyrophilin-like protein 8) ELISA Kit山羊α1性糖蛋白(α1-AGP)免疫試劑盒

熱帶假絲酵母緊密連接蛋白3抗體Human BubR1 (MAD3/BUB1-related protein kinase) ELISA Kit山羊toll樣受體2(TLR2)免疫試劑盒

露濕粘座孢霉（或露濕漆斑菌）磷化原癌基因c-Jun抗體Human BCAT1/ECA39 ELISA Kit山羊M型肌激(CKM)免疫試劑盒

殼囊孢屬磷化原癌基因c-Jun抗體Human BCL2L10 ELISA Kit山羊C型鈉尿肽(CNP)免疫試劑盒

穗狀平臍蠕孢1號(hào)染色體開放閱讀框86抗體Human BCL6(B-cell lymphoma 6 protein) ELISA Kit山羊C反應(yīng)蛋白(CRP)免疫試劑盒

芽胞桿菌8號(hào)染色體開放閱讀框59抗體Human BRD9 (Bromodomain-containing protein 9) ELISA Kit山羊CD14分子(CDl4)免疫試劑盒

紫色直絲鏈霉菌磷化補(bǔ)體成分5受體1抗體Human C14orf28 (Dopamine receptor-interacting protein 1) ELISA Kit山羊Ⅰ型膠原C端肽(CTX-Ⅰ)免疫試劑盒

鴨瘟立默氏菌Riemerella│anatipestifer 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRP2蛋白抗體試劑盒苦龍膽酯苷

芽孢桿菌屬菌種Bacillus│T. 質(zhì)量規(guī)格：>98%，植物激級(jí)P27蛋白試劑盒康普瑞磷二鈉

釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格：BRP0蛋白抗體試劑盒康普瑞
磷脂染色液NA(Human Noradrenaline) ELISA Kit  人去jia腎上腺su規(guī)格： 48T

PGF(Human Prostaglandin F) ELISA Kit  人前列腺suF規(guī)格： 48T

PGE1(Human Prostaglandin E1) ELISA Kit  人前列腺suE規(guī)格： 48T

ET-1(Human Endothelin 1) ELISA Kit  人內(nèi)皮su1規(guī)格： 48T

FSH(Human follicle-stimulating hormone) ELISA Kit  人促卵泡su規(guī)格： 48T

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜；注：對(duì)于需要更高密度來檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。