商品介紹:
測(cè)定意義 GS(EC 6.3.1.2)主要存在于植物中,是生物體內(nèi)氨同化的關(guān)鍵酶之一,催化銨離子和谷氨酸合成谷氨酰胺,不僅可以防止過(guò)多的銨離子對(duì)生物有毒性,而且谷氨酰胺也是氨的主要儲(chǔ)存和運(yùn)輸形式。 測(cè)定原理 GS在ATP和Mg2+存在下,催化銨離子和谷氨酸合成谷氨酰胺;谷氨酰胺進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為γ─谷氨酰基異羥肟酸,在酸性條件下與鐵形成紅色的絡(luò)合物;該絡(luò)合物在540nm處有最大吸收峰,可用分光光度計(jì)測(cè)定。 所需的儀器和用品 可見分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。 |
商品屬性:
試劑的組成和配制:
酸性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;堿性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;試劑一:液體10 mL×1瓶,4℃保存;試劑二:液體3 mL×1瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1瓶,-20 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑四:粉劑×1瓶,4 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑五:液體3.6mL×1瓶,4 ℃保存;試劑六:液體30mL×1瓶,4 ℃保存;試劑七:液體50mL×1瓶,4 ℃保存。
自備儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
NAD+和NADH的提取:
1、血清(漿)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml酸性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml堿性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 2、組織中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提取:按照組織質(zhì)量(g):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中和, 混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 3、細(xì)胞或細(xì)菌中NAD+和NADH的提取: NAD+的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):酸性 提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml酸性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):堿 性提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml堿性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 |
ADH測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2?!鰽空白管=A1-A2。。
4. 測(cè)定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A3和A4?!鰽測(cè)定管=A3-A4。
注意:空白管只需測(cè)定一次。
Vildagliptin(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Ifosfamide促腎上腺皮質(zhì)激釋放因子抗體包裝1g
α-甘(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Ifosfamide促腎上腺皮質(zhì)激釋放因子抗體包裝5g
α-對(duì)羥基甘(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Pramipexole 2HCL monohydrate5號(hào)染色體開放閱讀框54抗體包裝1g
α-代-β-英文名: Pramipexole 2HCL monohydrateCD93抗體包裝5g
α-基吡啶(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Vinblastine Sulfate嗜粒趨化蛋白CCL6抗體包裝5g
α-三聯(lián)噻吩(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Vinblastine Sulfate6號(hào)染色體開放閱讀框81抗體包裝1g
α-戊二(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Vinblastine Sulfate巨噬炎性蛋白1β抗體包裝1g
β-Estradiol(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: TemozolomideNK抑制性受體2DL4抗體包裝5g
β-(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: TemozolomideNK抑制性受體2DS4抗體包裝1g
β-環(huán)糊精(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: AminoglutethimideNK抑制性受體3DL1抗體包裝5g
阿達(dá)唑(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Aminoglutethimide7號(hào)染色體開放閱讀框46抗體包裝100g
阿達(dá)帕林(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Flutamide蛋白磷PP2A癌抑制蛋白抗體包裝25g
阿德福韋(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Flutamide巨噬甘露糖受體CD206抗體包裝1g
阿德福韋/阿德福韋酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Cyclophosphamide淋巴衍生C-型凝集抗體包裝5g
(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Cyclophosphamide5號(hào)染色體開放閱讀框60抗體包裝1g
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品血管生成抑制因子試劑盒新對(duì)葉百部堿;Neotuberostem
慢生大豆根瘤菌Bradyrhizobium│japonicum 質(zhì)量規(guī)格:含量>98.5%,BR血管生成樣蛋白4試劑盒小蕓木;Micromelin
ATCC17588=IFO14165=IAM12668資源名稱: 施氏假單胞菌 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR血管生成樣蛋白3試劑盒薟精;Darutigenol
谷氨酰胺合成酶(GS)測(cè)試盒50管/24樣五通橋毛霉 順-4-環(huán)己烯-1,2-二羧酸風(fēng)疹病IgG抗體Elisa
球型接合酵母 2-(1-咪唑基)乙酸流行性腮腺炎病IgG抗體Elisa
地衣芽孢桿 6-溴己酰神經(jīng)絲中鏈蛋白MElisa
釀酒酵母 2,6-二氟苯Ⅷ相關(guān)抗原Elisa
枯草芽孢桿 2,3,4-三氟苯酸磷酸化tauElisa
葡萄擬莖點(diǎn)霉 異硫酸異酯腮腺炎病IgM抗體Elisa
灰葡萄孢(測(cè)序正確) (1R,2R,3S,5R)-(-)-2,3-蒎烷二水痘帶狀皰疹病IgM抗體Elisa
根瘤 5-丁基噁唑-2,RNA結(jié)合基元蛋白8Elisa
鹽地喜鹽芽孢桿 D(-)-阿糖酸鈣CXC趨化因子配體1Elisa
根霉 N-乙烯基己內(nèi)酰輪狀病Elisa
*豬苓 2',4'-二苯乙酮甲酰甲硫Elisa
粘質(zhì)沙雷氏 3,5-二甲基-4-羥基苯甲抗小鼠抗體Elisa
丁香鏈霉 1-(對(duì)甲苯磺酰)咪唑多配體蛋白聚糖1Elisa
蘋果鏈格孢 硫代甲肼核因子κB受體激活因子配體Elisa
盤長(zhǎng)孢狀盤孢 2-羥基異單純皰疹?、?Ⅱ型IgM抗體Elisa
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。