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產(chǎn)品分類：免疫組化

儲存條件：4℃,12個月

用途：組織化學常用緩沖液

注意事項：主要由磷酸二氫鹽(鈉/鉀)和磷酸氫二鹽(鈉/鉀)溶液組成,按不同比例混合后獲得對用PH值。pH值可選5.3,5.6,5.91,6.24,6.47,6.64,6.81,6.98,7.17,7.73,8.04。

 

 

配制與標定的實驗原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標準溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標定EDTA標準溶液的工作基準試劑，基準試劑的預處理：稱量前一般應先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標線，搖勻。

 

 

實驗方法與判定：

1.對照品溶液的穩(wěn)定性

2.對照品溶液的配制：精密量取腦對照品適量，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細管柱；柱溫120℃；進樣口溫度250℃；檢測器溫度250℃；分流進樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計算應不低于10000。

4.實驗方法：配制的對照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液，三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量。記錄下來，保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%，驗證對照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

腐皮鐮孢菌二單加氧5抗體Human AMHR2 (Anti-Muellerian hormone type-2 receptor) ELISA KIT綿羊甲狀腺(T4)免疫試劑盒

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Arenibacter certesii 胚胎干相關蛋白FOPNL抗體Human Appbp2(Amyloid protein-binding protein 2) ELISA Kit綿羊花生四烯(AA)免疫試劑盒

魯能鎖擲孢酵母磷化癌基因FOS蛋白B抗體Human ANAPC2 (Anaphase-promoting complex subunit 2) ELISA KIT綿羊骨鈣/骨谷蛋白(OT/BGP)免疫試劑盒

弗氏檸檬桿菌叉頭蛋白D2抗體Human ANK1(Ankyrin-1) ELISA Kit綿羊睪(T)免疫試劑盒

卷枝毛霉叉頭蛋白E3抗體Human ANLN (Actin-binding protein anillin) ELISA KIT綿羊甘油-3-磷脫氫(GAPDH)免疫試劑盒

運動節(jié)桿菌叉頭蛋白F2抗體Human ANKFY1 (Rabankyrin-5) ELISA KIT綿羊肺表面活性物質(zhì)相關蛋白C(SP-C)免疫試劑盒

根瘤菌叉頭蛋白H1抗體Human Appbp2(Amyloid protein-binding protein 2) ELISA Kit綿羊肺表面活性物質(zhì)相關蛋白B(SP-B)免疫試劑盒

黃曲霉叉頭蛋白I1抗體Human ANAPC2 (Anaphase-promoting complex subunit 2) ELISA KIT綿羊酯化脂肪(NEFA)免疫試劑盒

紫云英根瘤菌磷化叉頭蛋白4抗體Human AIF1L (Allograft inflammatory factor 1-like) ELISA KIT綿羊二受體(ER-Alpha)免疫試劑盒

Staphylococcus│aureus 質(zhì)量規(guī)格：standard for GC,>99.5%莰烯

: CBS158.86資源名稱: 釀酒酵母 質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC, ≥99.5% (GC)L-蛋（硫)

肉蘑(血紅鉚釘菇)Chroogomphus│rutilus (Schaeff.) O.K. Mill. 質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC,>99.7%(GC)DL-蛋（硫)
Sorensen磷酸緩沖液Human Acylation Stimulating Protein,ASP ELISA Kit  人酰化刺激蛋白規(guī)格： 48T

Human bactericidal/permeabilityincreasingprotein,BPI ELISA Kit  人殺jun性/通透性增加蛋白規(guī)格： 48T

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Human replication protein A,RPA-70 ELISA Kit  人復制蛋白A規(guī)格： 48T

Human cartilage oligomeric matrix protein,COMP ELISA Kit  人軟骨寡聚基質(zhì)蛋白規(guī)格： 48T

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩(wěn)轉株的工作濃度需要根據(jù)細胞類型，培養(yǎng)基，生長條件和細胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應性曲線，來確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動物細胞50-500μg/mL；細菌/植物細胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞株，需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應曲線）來實現(xiàn)，至少選擇5個濃度。

1）  第一天：未轉化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜；注：對于需要更高密度來檢測活力的細胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細胞類型，設定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例，可設定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進行活細胞計數(shù)來確定阻止未轉染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細胞的濃度為穩(wěn)定轉染細胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉染細胞的篩選

1）  轉染48h后，用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷。則當細胞過于稠密，其效率會降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細胞稀釋至豐度不超過25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評估細胞克隆（集落）的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間，這取決于宿主細胞類型，轉染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。