詳細(xì)介紹
產(chǎn)品分類:免疫組化
儲(chǔ)存條件:室溫,12個(gè)月
用途:玻片的硅化,包括蓋玻片和載玻片
注意事項(xiàng):主要由APES組成。
公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點(diǎn),咨詢并訂購!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
APES防脫劑 | 10ml | FS-R7196 |
配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理:
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一種白色晶體粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑,基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理:稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層,然后用水洗凈,烘干。
配制步驟:
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自來水、純水洗凈,烘干、冷卻。
2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15~0.2g Zn,蓋好小表面皿。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中,用純水稀釋至標(biāo)線,搖勻。
實(shí)驗(yàn)方法與判定:
1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性
2.對(duì)照品溶液的配制:精密量取腦對(duì)照品適量,加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。
3.色譜條件:以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱;柱溫120℃;進(jìn)樣口溫度250℃;檢測器溫度250℃;分流進(jìn)樣,分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。
4.實(shí)驗(yàn)方法:配制的對(duì)照品溶液,一份置冷處保存,一份置室溫中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液,三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來,保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過2.0%,驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型,培養(yǎng)基,生長條件和細(xì)胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應(yīng)性曲線,來確定最佳篩選濃度。
一般而言,哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL;細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株,需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度,可通過建立殺滅曲線(劑量反應(yīng)曲線)來實(shí)現(xiàn),至少選擇5個(gè)濃度。
1) 第一天:未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,CO2培養(yǎng)過夜;注:對(duì)于需要更高密度來檢測活力的細(xì)胞,可增加接種量。
2) 根據(jù)細(xì)胞類型,設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例,可設(shè)定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。
3) 第二天:替換舊的培養(yǎng)基,換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。
4) 接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10天)內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。
3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選
1) 轉(zhuǎn)染48h后,用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密,其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3) 篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間,這取決于宿主細(xì)胞類型,轉(zhuǎn)染,以及篩選效果。
4) 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。
黑曲霉FAM13B1蛋白抗體Human BCDIN3D (Pre-miRNA 5′-monophosphate methyltransferase) ELISA KIT綿羊游離狀腺原(Free-T3)免疫試劑盒
側(cè)孢短芽孢桿菌巖藻糖轉(zhuǎn)移8抗體Human BCL10 (B-cell lymphoma/leukemia 10) ELISA KIT綿羊游離甲狀腺(FT4)免疫試劑盒
長枝木霉卵泡激結(jié)合蛋白1抗體Human BNIPL (Bcl-2/adenovirus E1B 19 kDa-interacting protein 2-like protein) ELISA KIT綿羊胰島樣生長因子1(IGF-1)免疫試劑盒
棱柱散尾菌相互作用蛋白FHL2抗體Human ABCC11 (ATP-binding cassette sub-family C member 11) ELISA KIT綿羊胰島(INS)免疫試劑盒
枯草芽胞桿菌脂肪去飽和1抗體Human ATRN(Attractin) ELISA Kit綿羊一氧化氮合成2,誘導(dǎo)型(NOS2)免疫試劑盒
糞腸球菌回腸脂肪結(jié)合蛋白抗體Human BNC1 (Zinc finger protein basonuclin-1) ELISA KIT綿羊血清淀粉樣蛋白A(SAA)免疫試劑盒
不動(dòng)桿菌屬脂肪型脂肪結(jié)合蛋白Human BTF3L4 (Transcription factor BTF3 homolog 4) ELISA KIT綿羊血管生成2(ANG-2/ANGPT2)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌脂肪酰還原2抗體Human BSPRY (B box and SPRY domain-containing protein) ELISA KIT綿羊褪黑(MT)免疫試劑盒
巨大芽胞桿菌脆性X相關(guān)蛋白樣2抗體Human BCDIN3D (Pre-miRNA 5′-monophosphate methyltransferase) ELISA KIT綿羊銅藍(lán)蛋白(CP)免疫試劑盒
根瘤菌脂肪酰水解2抗體Human ATP2A1 (Sarcoplasmic/endoplasmic reticulum calcium ATPase 1) ELISA KIT綿羊甜菜堿-同型半胱S-甲基轉(zhuǎn)移1(BHMT)免疫試劑盒
豇豆慢生根瘤菌卷曲蛋白FZD7抗體Human DIO3(Type III iodothyronine deiodinase) ELISA Kit綿羊髓過氧化物(MPO)免疫試劑盒
布蘭克假絲酵母口蹄疫病A型抗體Human ABCA4 (Retinal-specific ATP-binding cassette transporter) ELISA KIT綿羊雙氫睪(DHT)免疫試劑盒
巨大芽孢桿菌磷化粘著斑激抗體Human BCL10 (B-cell lymphoma/leukemia 10) ELISA KIT綿羊生長激(GH)免疫試劑盒
金龜子綠僵菌抗體Human APITD1 (Centromere protein S) ELISA KIT綿羊狀腺原(T3)免疫試劑盒
蘇云金芽孢桿菌溫泉亞種鋅指蛋白798抗體Human ALOX5AP (Arachidonate 5-lipoxygenase-activating protein) ELISA KIT綿羊溶菌(LZM)免疫試劑盒
黑曲霉肽基脯酰順反異構(gòu)FKBP10抗體Human DIO3(Type III iodothyronine deiodinase) ELISA Kit綿羊熱休克蛋白70(HSP-70)免疫試劑盒
克氏梭菌Clostridium│kluyveri 質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC,≥99.5%(GC)沒食子酯
繩狀青霉Penicillium│funiculosum Thom 質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC,≥99.0%蘆薈寧
枯草芽孢桿菌Bacillus│subtilis 質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC,>99%(GC)L-亮(白)
APES防脫劑Human orosomucoid,ORM ELISA Kit 人類粘蛋白規(guī)格: 48T
Human Elastin,ELN ELISA Kit 人彈性蛋白規(guī)格: 48T
Human Involucrin,iNV ELISA Kit 人套膜蛋白規(guī)格: 48T
Human tenascin-R,TN-R ELISA Kit 人肌腱蛋白R(shí)規(guī)格: 48T
Human growth-associated protein 43,GAP-43 ELISA Kit 人生長相關(guān)蛋白43規(guī)格: 48T