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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | A01X1346 | 主要用途 | 僅供科研研究實驗 |
| 組織來源 | 胰腺組織 | 種屬來源 | 人 |
| 生長特性 | 貼壁 |
詳細(xì)介紹
一、細(xì)胞基本屬性：
細(xì)胞名稱 | 人胰島細(xì)胞 | 商品貨號 | A01X1346 |
組織來源 | 胰腺組織 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 人 | 傳代特性 | 根據(jù)細(xì)胞特性 |
生長特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) |
包被條件：
培養(yǎng)基：原代上皮細(xì)胞培養(yǎng)體系
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞簡介 |
胰腺分為外分泌腺和內(nèi)分泌腺兩部分。外分泌腺由腺泡和腺管組成，腺泡分泌胰液，腺管是胰液排出的通道。胰液中含有碳、胰蛋bai酶原、脂肪酶、淀粉等。胰液通過胰腺管排入十二指腸，有消化蛋白質(zhì)、脂肪和糖的作用。 內(nèi)分泌腺由大小不同的細(xì)胞團(tuán)-胰島所組成，胰島主要由4種細(xì)胞組成：胰島能分泌胰島素與胰高血糖素等激素。人類的胰島細(xì)胞按其染色和形態(tài)學(xué)特點，主要分為α細(xì)胞、β細(xì)胞、γ細(xì)胞及PP細(xì)胞。α細(xì)胞約占胰島細(xì)胞的20%，分泌胰高血糖素；β細(xì)胞占胰島細(xì)胞的60%-70%，分泌胰島素；γ細(xì)胞占胰島細(xì)胞的10%，分泌“生長抑"；PP細(xì)胞數(shù)量很少，分泌胰多肽。 |
原代細(xì)胞實驗步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì)。
五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液。
原代細(xì)胞使用方法：
是一種貼壁細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞可傳2-3代；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實驗。
客戶收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1)收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；
4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。
5)原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。
4. 細(xì)胞實驗
因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。
公司正在出售的產(chǎn)品：
大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞，EBMEC細(xì)胞
大鼠腦血管周細(xì)胞，RBVP細(xì)胞
大鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞
大鼠皮膚成纖維細(xì)胞，RDF細(xì)胞
大鼠脾基質(zhì)細(xì)胞
大鼠脾源性內(nèi)皮祖細(xì)胞
大鼠破骨細(xì)胞
大鼠氣管平滑肌細(xì)胞
大鼠氣管上皮細(xì)胞
大鼠前列腺成纖維細(xì)胞
大鼠前列腺上皮細(xì)胞
大鼠前脂肪細(xì)胞
大鼠乳腺成纖維細(xì)胞
大鼠乳腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞
大鼠乳腺上皮細(xì)胞
晶粒鬼傘Coprinus micaceus (Bull.) Fr.
酒紅鏈霉菌Streptomyces vinaceus
酒釀醋酸桿菌Acetobacter cerevisiae
就地堆肥地芽孢桿菌Geobacillus toebii
駒形氏亮桿菌Leucobacter komagatae
局限曲霉Aspergillus restrictus
桔綠木霉Trichoderma citrinoviride Bissett
菊糖芽孢乳桿菌Sporolactobacillus inulinus
橘灰青霉Penicillium aurantiogriseum
橘青霉Penicillium citrinum
人胰島細(xì)胞巨胞氮單胞菌Azomonas macrocytogenes
巨大芽孢桿菌Bacillus megaterium de Bary
巨大芽胞桿菌Bacillus megaterium
具核梭桿菌具核亞種Fusobacterium nucleatum subsp. nucleatum
聚多曲霉Aspergillus sydowii
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