詳細介紹
抗體的制備過程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物:常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經除菌并添加防腐劑。
產品名稱 | 磷酸化自噬相關蛋白4B抗體 |
英文名稱 | phospho-APG4B(Ser309) |
規(guī)格 | 0.1ml |
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公司專業(yè)供應的抗體,抗體是用于化學反應、分析化驗、研究實驗、教學實驗、化學配方使用的純凈化學品,產品品質,價格實惠,多種規(guī)格供應,售后完善??贵w的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定
得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存
建議將抗體分裝后進行保存??贵w一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經除菌并添加防腐劑。
抗體分子標記技術:
(一)原理
當應用化學氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團進行鹵化反應。蛋白質分子可進行鹵化反應的基團主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進行化。在應用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發(fā)性的有機溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質液加入包被好的試管中,反應完成即將混合液移入他管終止反應。
(二)準備
1.試劑
經親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鮮制備的含2mg/m1絡胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應終止緩沖液;
2.儀器
凝膠過濾柱;¥-記數(shù)器;玻璃纖維濾。
(三)操作要點
1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行;
2.如果氧化反應損傷蛋白質,可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標記的抗體,在制備后六周內均可使用(1251的半衰期為59.6天);
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結合位點有干擾,因此降低其結合能力,但這種情況很少見。
抗體制備過程:
1.材料與試劑
a.提取的動物 Ig
b.弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑
c.青霉素和鏈霉素
d.實驗動物 兔
e.其它材料及試劑
2、選擇實驗活體。
3、進行動物免疫實驗。
4、試取血樣進行測試,查看免疫效果。
5、如果免疫成功,殺死實驗活體,采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。胎牛血清(無菌采制)
雪白曲霉現(xiàn)貨,ATCC菌株
彎孢霉屬菌種培養(yǎng),ATCC菌株
田無鏈霉菌保存,ATCC菌株
天青鏈霉菌售價,ATCC菌株
同絲毛殼現(xiàn)貨,ATCC菌株
天藍微紅鏈霉菌變種培養(yǎng),ATCC菌株
炭角菌屬保存,ATCC菌株
貪噬菌屬菌種售價,ATCC菌株
RAB11家族相互作用蛋白3(RAB11FIP3)ELISA Kit for RAB11 Family Interacting Protein 3 (RAB11FIP3)規(guī)格:48T/96T
肌球蛋白ⅤC(MYO5C)ELISA Kit for Myosin VC (MYO5C)規(guī)格:48T/96T
磷酶D5(PLD5)ELISA Kit for Phospholipase D5 (PLD5)規(guī)格:48T/96T
Paralemmin 3蛋白(PALM3)ELISA Kit for Paralemmin 3 (PALM3)規(guī)格:48T/96T
皮層肌動蛋白(CTTN)ELISA Kit for Cortactin (CTTN)規(guī)格:48T/96T
外異蛋白A(EDA)ELISA Kit for Ectodysplasin A (EDA)規(guī)格:48T/96T
鈣黏蛋白24(CDH24)ELISA Kit for Cadherin 24 (CDH24)規(guī)格:48T/96T
核糖核酶A9(RNASE9)ELISA Kit for Ribonuclease A9 (RNASE9)規(guī)格:48T/96T
半乳糖凝集素9B(GAL9B)ELISA Kit for Galectin 9B (GAL9B)規(guī)格:48T/96T
酰膽堿酯酶(AchE)ELISA Kit for Acetylcholinesterase (AchE)規(guī)格:48T/96T
神經絲束蛋白(NPTN)ELISA Kit for Neuroplastin (NPTN)規(guī)格:48T/96T
嘌呤基轉移酶(TPMT)ELISA Kit for Thiopurine Methyltransferase (TPMT)規(guī)格:48T/96T
磷酸化自噬相關蛋白4B抗體Human thrombomodulin,TM 檢測試劑盒 血栓調節(jié)蛋白* 規(guī)格: 48T/96T
Human thrombin-antithrombin complex,TAT 檢測試劑盒 凝血酶抗凝血酶復合物* 規(guī)格: 48T/96T
Human thrombin receptor,TR 檢測試劑盒 凝血酶受體* 規(guī)格: 48T/96T
Human Thrombin activatable fibrinolysis inhibitor,TAFI 檢測試劑盒 纖溶抑制因子/凝血酶激活的纖溶抑制物* 規(guī)格: 48T/96T
Human Tetanus Antibody 檢測試劑盒 破傷風抗體* 規(guī)格: 48T/96T
Human terminal complement complex C5b-9,TCC C5b-9 檢測試劑盒 末端補體復合物C5b-9* 規(guī)格: 48T/96T
Human tenascin-R,TN-R 檢測試劑盒 肌腱蛋白R* 規(guī)格: 48T/96T