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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | A01X1472 | 主要用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
| 組織來源 | 眼組織 | 種屬來源 | 人 |
| 生長(zhǎng)特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 呈鵝卵石樣，不規(guī)則細(xì)胞 |
詳細(xì)介紹
一、細(xì)胞基本屬性：
細(xì)胞名稱 | 人脈絡(luò)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞 | 商品貨號(hào) | A01X1472 |
組織來源 | 眼組織 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 人 | 傳代特性 | 細(xì)胞特性確定傳代 |
生長(zhǎng)特性 | 貼壁培養(yǎng) | 細(xì)胞形態(tài) | 呈鵝卵石樣，不規(guī)則細(xì)胞 |
包被條件：
培養(yǎng)基：原代內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)體系
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相： 空氣，95%；CO2 ，5%
細(xì)胞簡(jiǎn)介 |
脈絡(luò)膜新生血管(choroidal neovascularization ，CNV)已成為眼科學(xué)領(lǐng)域的研究 熱點(diǎn)之一， 目前多數(shù)體外研究應(yīng)用的是人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞或主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞等容 易得到的大血管內(nèi)皮細(xì)胞。由于血管內(nèi)皮細(xì)胞具有器官特異性和組織特異性，用 大血管內(nèi)皮細(xì)胞的研究結(jié)果很難客觀、準(zhǔn)確地解釋CNV的發(fā)生機(jī)制。因此， 建立 脈絡(luò)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞(choroidal microvascular endothelial cells ，CEC)體外 培養(yǎng)體系， 對(duì)深入研究CNV相關(guān)疾病具有十分重要的價(jià)值。 |
原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺(tái)中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì)。
五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液。
原代細(xì)胞使用方法：
是一種貼壁培養(yǎng)細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈呈鵝卵石樣，不規(guī)則細(xì)胞，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞可傳2-3代；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
客戶收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1)收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)；
4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。
5)原瓶?jī)?nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí)，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn)；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。
公司正在出售的產(chǎn)品：
人卵巢微血管內(nèi)皮細(xì)胞
小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞
小鼠冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞
人乳腺上皮細(xì)胞
人正常肺成纖維細(xì)胞
人外陰鱗癌細(xì)胞
人成纖維細(xì)胞
大鼠卵巢癌細(xì)胞
人NK細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞
小鼠肝細(xì)胞
人包皮皮膚成纖維細(xì)胞
人髓樣甲狀腺癌細(xì)胞
大鼠胰腺癌細(xì)胞
低分化人食管鱗癌細(xì)胞
人髓系白血病細(xì)胞
Staphylococcus haemolyticus溶血葡萄球菌
Staphylococcus sciuri松鼠葡萄球菌
Stappia indica印度洋斯塔普氏菌
Stenotrophomonas acidaminiphila嗜酸寡養(yǎng)單胞菌
Streptococcus dysgalactiae停乳鏈球菌
Streptococcus hyovaginalis豬陰道鏈球菌
Streptococcus pneumoniae肺炎鏈球菌
Streptococcus pyogenes釀膿鏈球菌
Sulfitobacter litoralis岸邊亞硫酸鹽桿菌
Sulfitobacter marinus海亞硫酸鹽桿菌
人脈絡(luò)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞Sulfitobacter pontiacus龐蒂亞克亞硫酸鹽桿菌
Syntrophobacter sulfatireducens還原硫酸鹽互營(yíng)桿菌
Sunxiuqinia elliptica橢圓孫秀琴氏菌
Syntrophomonas cellicola棲酒窖共養(yǎng)單胞菌
Syntrophomonas curvata彎曲共養(yǎng)單胞菌
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