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細(xì)胞培養(yǎng)無菌操作基本技術(shù)
點擊次數(shù)：608 發(fā)布時間：2016-10-18
1)實驗前,無菌室及無菌操作臺用紫外燈照射30-60分鐘滅菌,用70% 酒精擦拭無菌操作臺面,并開啟無菌操作臺風(fēng)機(jī)運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘后,才可開始實驗操作.每次操作只處理一株細(xì)胞,以免造成細(xì)胞交叉污染.實驗結(jié)束后,將實驗物品帶出工作臺.如需要繼續(xù)進(jìn)行下一個實驗,則用70% 酒精擦拭無菌操作臺面,再讓無菌操作臺風(fēng)機(jī)運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘后,才可進(jìn)行下一個實驗操作.
(2)無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔與寬敞,必要物品,如試管架,移液器或吸管頭等可以暫時放置,其它實驗用品用完后應(yīng)及時移出,以利氣體流通.實驗用品要用70%酒精擦拭后才能帶入無菌操作臺內(nèi).實驗操作應(yīng)在操作臺中央無菌區(qū)域內(nèi)進(jìn)行,勿在邊緣非無菌區(qū)域操作.
(3)小心取出無菌實驗用品,避免造成污染.切勿碰觸吸管與吸頭頭部或容器瓶口,不要在打開的容器正上方操作實驗.容器打開后,用手夾住瓶蓋并握住瓶身,傾斜約45°角取用,盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放在臺面上.
(4)工作人員應(yīng)注意自身的安全,必須穿戴實驗衣與手套后才進(jìn)行實驗.對于來自人源性或病毒感染的細(xì)胞株應(yīng)特別小心,并選擇適當(dāng)?shù)燃壍臒o菌操作臺(至少兩級).操作過程中,應(yīng)避免引起氣溶膠的產(chǎn)生,小心有毒性試劑,例如DMSO及TPA等,并避免尖銳物品傷人等.
(5)定期檢查下列項目:CO2鋼瓶內(nèi)的CO2壓力;CO2培養(yǎng)箱內(nèi)的CO2濃度,溫度,及水盤是否有污染;無菌操作臺內(nèi)氣流壓力是否正常,定期更換紫外燈管及HEPA過濾器濾膜,預(yù)濾網(wǎng)（300小時/預(yù)濾網(wǎng),3000小時/HEPA）.