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HL10157.3 v.A

 

體液鈣離子濃度熒光定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書

 

主要用途

 

體液鈣離子濃度熒光定量檢測試劑是一種旨在通過鈣離子特異性熒光探針Fluo-4，與鈣離子結(jié)合后，其熒光強度顯著增強，在熒光分光光度儀下觀察相對熒光峰值的變化，來測定樣品中總鈣離子濃度的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種體液包括血漿、血清、細胞培養(yǎng)液、尿液、腦脊液、唾液、精液等樣品中總鈣離子的濃度檢測。產(chǎn)品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，檢測敏感。

 

技術(shù)背景

 

鈣是人體中的一種重要電介質(zhì)和礦物質(zhì)，占1150克。其中99％的鈣以氟磷灰石鈣（calcium fluorophosphate apatite）形式存在于骨組織中。非骨組織鈣成分主要存在于細胞內(nèi)。鈣具有兩種主要形式：一種是非彌散型蛋白結(jié)合鈣，其構(gòu)成約40％至50％的血清中的總鈣含量；另一種為彌散型游離鈣，其進一步分成具有活性的復合鈣（complexed calcium）和離子鈣（ionized calcium）。鈣對神經(jīng)肌肉興奮性（neuromuscular excitability）、血液凝固、酶的激活、離子跨膜運輸、釋放神經(jīng)傳導介質(zhì)、信使傳導等方面起著重要作用。鈣的檢測包括沉淀法、EDTA鰲合滴定法、火焰光度法（flame photometry）、原子吸收分光光度法等技術(shù)，但容易受到鈉、鉀、磷酸鹽、硫酸鹽的干擾，或者受限于儀器的特殊的要求。Fluo-4，一種與鈣離子結(jié)合，其熒光強度迅速增強100倍的熒光探針，可以敏感測定微量游離鈣離子水平。在熒光分光光度儀下，激發(fā)波長485nm，散發(fā)波長520nm，來定量測定體液中的鈣濃度。

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

反應(yīng)液（Reagent A）       毫升

飽和液（Reagent B）       毫升

陰性液（Reagent C）       毫升

產(chǎn)品說明書     1份

 

保存方式

 

保存在－20℃冰箱里；反應(yīng)液（Reagent A）避免光照；有效保證6月

 

用戶自備

 

1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器

微型臺式離心機：用于樣品沉淀

黑色96孔板：用于樣品熒光測定的容器

熒光酶標儀：用于樣品熒光分析

 

 

 

實驗步驟

 

• 樣品準備

 

選擇一：血漿樣品

• 準備好肝素或ACD抗凝管（注意：避免使用EDTA抗凝管）
• 抽取1毫升血液，置于抗凝管里
• 放進4℃微型臺式離心機離心10分鐘，速度為700g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心移取上層黃色液體到新的1.5毫升離心管――此為血漿成分（注意：避免觸碰白色液體層）
• 即刻置于冰槽里備用或放進－70℃冰箱里保存

 

選擇二：血清樣品

1． 準備好不含抗凝劑的儲存管

• 抽取1毫升血液，置于儲存管里
• 室溫下，靜置30分鐘，直至血液凝結(jié)
• 放進4℃微型臺式離心機離心15分鐘，速度為2000g（或5000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心移取上層黃色液體到新的1.5毫升離心管――此為血清成分（注意：避免觸碰白色液體層）
• 即刻置于冰槽里備用或放進－70℃冰箱里保存

 

選擇三：細胞培養(yǎng)液/尿液/腦脊液/唾液/精液樣品 

• 準備好1.5毫升離心管
• 移取1毫升液體到離心管
• 放進4℃微型臺式離心機離心10分鐘，速度為700g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心移取上清液到新的1.5毫升離心管
• 即刻置于冰槽里備用或放進－70℃冰箱里保存

 

• 測定準備

 

• 準備好上述制備的待測樣品，置于冰槽里備用
• 設(shè)定好熒光酶標儀（22℃）：激發(fā)波長485nm，散發(fā)波長520nm

 

三、熒光測定

 

• 準備1個黑色96孔板，標記為：樣品孔、空白對照孔、大對照孔
• 移取100微升（20微克蛋白）上述制備的樣品到樣品孔里
• 移取xx微升飽和液（Reagent B）到大對照孔里
• 移取xx微升陰性液（Reagent C）到空白對照孔
• 分別加入xx微升反應(yīng)液（Reagent A）到所有孔里
• 輕輕搖動黑色96孔板，混勻
• 室溫下（22℃），孵育30分鐘，避免光照
• 即刻放進熒光酶標儀測讀：獲得相對熒光單位（relative fluorescence unit；RFU） 
• 計算樣品鈣離子濃度：納摩爾（注意：不要遺忘乘上稀釋倍數(shù)）

 

【（樣品RFU－空白對照孔RFU）÷（大對照孔RFU－樣品RFU）】X 345 （納摩爾；解離常數(shù)）

注意事項

 

• 本產(chǎn)品為20次操作
• 操作時，須戴手套
• 避免使用EDTA等處理樣品
• 孵育反應(yīng)完成后即刻進行熒光測定
• 如果待測樣品濃度過高或過低，可以調(diào)整樣品濃度
• 檢測敏感度可達納摩爾級鈣濃度范圍
• 本公司提供系列鈣生化檢測試劑產(chǎn)品

 

質(zhì)量標準

 

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測敏感