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如果你常做WB實(shí)驗，結(jié)果不穩(wěn)定，沒有筆直的條帶，背景高，你的救星來了！這個美譽(yù)度非常高的ECL發(fā)光液，我?了3年，強(qiáng)?推薦！別看它只是一瓶小小的試劑，能量卻特別大，輕輕一滴，靜等3分鐘，在印跡膜上你會看到一條筆直的白光緩緩發(fā)出，太漂亮了，一天做實(shí)驗的疲憊感瞬間就消失了。目前市場上的 ECL顯色液質(zhì)量參差不齊，如何去挑選適合自己實(shí)驗的ECL就顯得特別重要，以下幾點(diǎn)建議大家反復(fù)閱讀并收藏。
01
靈敏度
反映的是ECL顯色液檢出被檢物質(zhì)低量的能力，用戶可根據(jù)樣本中待檢指標(biāo)的量選擇合適的檢測試劑，在做實(shí)驗前需要對靶蛋白進(jìn)行文獻(xiàn)調(diào)研。不能盲目選擇靈敏度過高的產(chǎn)品，例如，針對GAPDH，選擇了靈敏度過高的ECL發(fā)光液，帶來的結(jié)果很可能就是顯影得到棕色條帶。
▲ 圖：高靈敏度ECL對GADPH顯影的影響
02
信號持久度
指的是加入ECL顯色液后，穩(wěn)定發(fā)光的持續(xù)時間。穩(wěn)定持久的發(fā)光可實(shí)現(xiàn)多次曝光以獲得最佳的圖像。由于每張膠片只能使用一次，在判斷曝光時長是否合適前必須進(jìn)行顯影。為了掌握信號和背景之間的平衡，一般都需要按照不同的時長曝光多次。如果膠片過曝了，信號可能會被背景掩蓋。
▲ 圖：曝光不同時間對顯影的影響
03
抗體稀釋度
一抗和二抗的稀釋度在說明書中一般都會有建議。稀釋度高的話，相對來說，可以減少一抗和二抗的消耗，節(jié)約更多的抗體，且可以降低雜蛋白的影響。
▲ 圖：二抗不同稀釋倍數(shù)對顯影的影響
04
信噪比
指的是正常目的信號與背景信號的比值，信噪比越高，ECL顯色的背景越低，目的條帶越清晰。
▲ 圖：高信噪比與低信噪比ECL對比
05
兼容性
比如對轉(zhuǎn)印膜、封閉試劑和各種抗體稀釋液等的兼容性。例如轉(zhuǎn)印膜有NC膜和PVDF膜，有些靈敏度不是特別高的ECL，會建議選擇NC膜。
06
文獻(xiàn)引用
產(chǎn)品的文獻(xiàn)引用數(shù)量和高質(zhì)量的 SCI 文章的引用是很多用戶都關(guān)心的問題，這是業(yè)界對產(chǎn)品認(rèn)可的一個非常重要指標(biāo)，至少其他的科研工作者已經(jīng)驗證過了該產(chǎn)品的質(zhì)量，出問題的概率會極低，而且對相關(guān)用戶的科研有一定的借鑒作用。小翌家的ECL發(fā)光液收集的SCI文獻(xiàn)已經(jīng)有60篇，且都是高質(zhì)量期刊。
▲ 圖：翌圣ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒文獻(xiàn)引用
07
蛋白表達(dá)豐度
很多新手會忽視的關(guān)鍵點(diǎn)，對目的蛋白一知半解，實(shí)驗很容易“翻車"。做實(shí)驗前首先要了解目的蛋白的細(xì)胞定位、表達(dá)特異性、分子量、異構(gòu)體、抗體等？靶蛋白的表達(dá)量是否在ECL發(fā)光液的檢測范圍內(nèi)？
很多蛋白的表達(dá)是有組織特異性的，例如，最近的熱門靶蛋白CLDN 18.2，CLDN 18.2蛋白的表達(dá)具有組織特異性，主要在胃和胃腺癌組織中表達(dá)。在正常生理狀態(tài)下，CLDN 18.2僅在胃粘膜上已分化的上皮細(xì)胞中表達(dá)，而在其它的健康組織中均無表達(dá)。還有一些蛋白，例如IL6和TFNA等炎癥因子，如果樣本未做刺激處理，目的蛋白表達(dá)含量很低，WB實(shí)驗結(jié)果中的條帶可能會很淺，這種情況下就需要選擇高靈敏度的ECL發(fā)光液來放大信號。
08
樣本量
在Western Blot實(shí)驗時，由于樣品蛋白難以提取，樣品量有限，靶標(biāo)的量在這種情況下可能很低，成像時通常會出現(xiàn)條帶微弱或檢測不到目標(biāo)條帶。這會使研究人員需要重復(fù)進(jìn)行實(shí)驗，這既浪費(fèi)時間又浪費(fèi)資源。除了在樣本提取，抗體濃度，封閉液等方面需要優(yōu)化外，發(fā)光液ECL也需要選擇靈敏度，檢測范圍更廣的發(fā)光液，可以讓研究者選擇更少的樣本體積，產(chǎn)生相同的強(qiáng)信號的結(jié)果。
09
簡便性
底物在保證高質(zhì)量數(shù)據(jù)的情況下，實(shí)驗時間越短，操作越便利，越容易受到用戶歡迎。這也不妨作為選擇ECL發(fā)光液的一個指標(biāo)。
▲ 圖:YeasenECL化學(xué)發(fā)光試劑盒操作步驟
10
經(jīng)濟(jì)性
國產(chǎn)試劑因為省去不少物流和報關(guān)費(fèi)用，與國外進(jìn)口試劑相比價格上有比較大的優(yōu)惠。有很多客戶因為對品牌的信任度問題，還是選擇國外進(jìn)口試劑。但是國產(chǎn)品中找一個美譽(yù)度高的品牌，也是一個非常好的選擇。通過行業(yè)調(diào)查公司以及網(wǎng)絡(luò)，相關(guān)宣傳資料等可以找到美譽(yù)度高的 ECL化學(xué)發(fā)光液供應(yīng)商，這個反映的不僅是產(chǎn)品質(zhì)量的問題，對供應(yīng)商的售前售后服務(wù)也是一個非常嚴(yán)格的檢驗。
▲ 圖:Yeasen ECL超敏型底物Super相對品牌T同級別底物，檢測靈敏度更高
有2種型號特別推薦，普適性非常強(qiáng)的Super ECL，它是發(fā)光液中的三好學(xué)生，靈敏、穩(wěn)定、性價比高。MaxiSignal型ECL，它像靈敏的過敏原，一點(diǎn)即發(fā)，可以觸動低飛克級的蛋白，光源長達(dá)8個小時，一下就消除了你的焦慮。
一般的實(shí)驗室或者剛開始做預(yù)實(shí)驗時，其實(shí)會配備2個不同靈敏度的發(fā)光液。以下這2個ECL基本上可以滿足實(shí)驗者的所有需求了。
選購指南
Yeasen | Enhanced ECL 增強(qiáng)型 | Super ECL 超敏型 | SuperDura 持久型 | MaxiSignal 最高靈敏度型 |
適用樣本 | 靶點(diǎn)豐度較高，常規(guī)蛋白樣本 | 靶點(diǎn)豐度低， 樣本有限 | 靶點(diǎn)豐度較低， 樣本有限 | 靶點(diǎn)豐度極低， 樣品珍貴 |
檢測靈敏度 | 中等皮克級 | 低皮克級 | 中等飛克級 | 低飛克級 |
信號持續(xù)時間 | < 2 h | < 12 h | < 24 h | < 8 h |
適用檢測系統(tǒng) | 所有試劑均適用X射線膠片，CCD成像儀 | |||
一抗稀釋濃度 | 1:1000-1:4000 | 1:1000-1:10000 | 1:1000-1:50000 | 1:5000-1:100000 |
二抗稀釋濃度 | 1:1000-1:4000 | 1:2000-1:10000 | 1:50,000-1:250,000 | 1:100,000-1:500,000 |
推薦用膜 | NC膜 | NC膜或PVDF膜 | NC膜或PVDF膜 | NC膜或PVDF膜 |
存儲穩(wěn)定性 | 室溫1年 | 室溫1年 | 室溫1年 | 4℃ 1年，室溫半年 |
優(yōu)勢 | 同一級別靈敏度中信號* | 適用于多數(shù)WB實(shí)驗 | 最長信號持續(xù)時間，極其適用于多次曝光 | 靈敏度，極其適用于痕量蛋白檢測 |
