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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
初級(jí)會(huì)員·12年您現(xiàn)在的位置： 首頁(yè)> 技術(shù)文章 > 上新 | 操作簡(jiǎn)單、快速準(zhǔn)確！腺相關(guān)病毒(AAV)定量檢測(cè)試劑盒強(qiáng)勢(shì)登場(chǎng)！
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基因治療作為一種新興療法，是向靶細(xì)胞引入正常有功能的基因，以糾正或補(bǔ)償致病基因所產(chǎn)生的缺陷，從而達(dá)到治療疾病的目的。目前大多數(shù)基因治療應(yīng)用的仍是病毒載體，這些病毒載體經(jīng)過(guò)改造后，已經(jīng)不具有致病性。廣泛應(yīng)用的病毒載體包括腺病毒載體（ADV）、慢病毒載體（LV）、單純皰疹病毒載體（HSV）、痘病毒載體（PV）及腺相關(guān)病毒載體（AAV）。作為遞送基因療法的有力工具，AAV是目前在研基因療法項(xiàng)目中應(yīng)用最為廣泛的病毒載體。以AAV載體為代表的基因治療藥物能修正遺傳病患者的基因缺陷，給一些遺傳性罕見(jiàn)病、神經(jīng)系統(tǒng)退化性疾病患者帶來(lái)了希望。
AAV的衣殼蛋白以二十面體的構(gòu)型聚集在一起，在結(jié)構(gòu)上形成刺狀突起，這些突起介導(dǎo)與靶向細(xì)胞表面蛋白質(zhì)的相互作用，賦予了不同類(lèi)型的AAV特異性地靶向不同組織地能力。AAV2是20世紀(jì)60年代從腺病毒中發(fā)現(xiàn)的AAV載體。迄今為止，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了13種原發(fā)性AAV血清型和100多種不同的變異體。每種血清型都具有細(xì)胞靶向性，可以靶向不同的細(xì)胞組織。
表1.不同AAV血清型以及它們相互作用的受體類(lèi)型和組織趨向性
AAV血清 | 原代受體 | 共受體 | 組織特異性 |
AAV2 | 肝素 | AAV受體、FGFR、LamR、整合素 | 中樞神經(jīng)系統(tǒng)、視網(wǎng)膜、肝臟 |
AAV5 | 唾液酸 | AAV受體、PDGFR | 中樞神經(jīng)系統(tǒng)、眼睛、肺 |
AAV6 | 唾液酸、肝素 | AAV受體、EGFR | 中樞神經(jīng)系統(tǒng)、肌肉、肺、心臟 |
AAV8 | 未知 | AAV受體、LamR、 | 中樞神經(jīng)系統(tǒng)、肝臟、心臟、眼睛 |
AAV9 | 半乳糖 | AAV受體、LamR、 | 中樞神經(jīng)系統(tǒng)、肝臟、心臟、肌肉 |
根據(jù)AAV滴度測(cè)定不同原理，可以將其分為物理滴度測(cè)定和生物學(xué)滴度測(cè)定兩大類(lèi)，生物學(xué)滴度包括感染滴度和轉(zhuǎn)導(dǎo)滴度。物理滴度，一般是指基因組滴度或者病毒顆粒滴度(衣殼滴度)。顆粒滴度主要是通過(guò)紫外吸光法、ELISA、HPLC等方法來(lái)測(cè)定，每種方法都有各自的優(yōu)缺點(diǎn)，其中ELISA因其重現(xiàn)性高、特異性好等特點(diǎn)而得到了廣泛的應(yīng)用，這也是監(jiān)管部門(mén)所建議的滴度測(cè)定方法之一。
產(chǎn)品應(yīng)用
翌圣生物推出腺相關(guān)病毒定量檢測(cè)試劑盒，可應(yīng)用于基因治療、細(xì)胞免疫治療、干細(xì)胞治療、生物大分子藥物治療等領(lǐng)域的研究，又可應(yīng)用于基因工程研究等基礎(chǔ)科研領(lǐng)域，還可以為基因治療、細(xì)胞免疫治療的CRO和CDMO企業(yè)進(jìn)行產(chǎn)能賦能。
檢測(cè)原理
以99302ES-AAV2 Titration ELISA Kit為例
99302ES是一種體外酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒，用于定量測(cè)定樣本中的AAV2衣殼含量。特異性抗AAV2單克隆抗體預(yù)包被在高親和力的酶標(biāo)板上。酶標(biāo)板孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本，經(jīng)過(guò)孵育，樣本中存在的AAV2衣殼與固相抗體結(jié)合。洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)后，加入檢測(cè)抗體孵育結(jié)合，經(jīng)洗滌，再加入酶結(jié)合物(Streptavidin-HRP)孵育結(jié)合。洗滌后，加入顯色底物 TMB，避光顯色。顏色反應(yīng)的深淺與樣本中AAV2衣殼的濃度成正比。加入終止液終止反應(yīng)，在450 nm 波長(zhǎng)測(cè)定吸光度值。
產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)
準(zhǔn)確度高
靈敏度好
精密度高
重復(fù)性好
線性范圍寬
特異性高
產(chǎn)品數(shù)據(jù)展示
標(biāo)準(zhǔn)曲線
質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)
Test Method | Acceptance Criteria | Test Result |
Precision | 3.30E+09capsids/ml（OD450nm） CV（n=10）<10% | 5.6% |
8.25E+08capsids/ml（OD450nm） CV（n=10）<10% | 5.7% | |
2.06E+08capsids/ml（OD450nm） CV（n=10）<10% | 5.0% | |
Accuracy | Recovery：70%-130% | 80.9% |
Specificity | Different serotypes of AAV was added to the solvent, murine serum, rabbit serum, sheep serum, and E. coli cell supernatant. There are no cross-reaction between the kit and other serotypes of AAV. | Conforms |
Linearity | R2≥99.0% | 99.7% |
產(chǎn)品推薦
產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
AAV2 Titration ELISA Kit | 96T | 99302ES |
AAV5 Titration ELISA Kit | 96T | 99303ES |
AAV6 Titration ELISA Kit | 96T | 99304ES |
AAV8 Titration ELISA Kit | 96T | 99305ES |
AAV9 Titration ELISA Kit | 96T | 99306ES |
