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磷酸鈣轉(zhuǎn)染試劑是一種經(jīng)典的基因轉(zhuǎn)染工具，它通過形成DNA-磷酸鈣共沉淀物，促進(jìn)細(xì)胞通過內(nèi)吞作用吸收DNA，適用于多種真核細(xì)胞的瞬時和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，以其操作簡便、成本低廉、轉(zhuǎn)染效率高而廣受歡迎。

基本原理

DNA與磷酸鈣的結(jié)合

在含有磷酸鹽的緩沖液（HBS）中，加入氯化鈣（CaCl2）溶液和含有目的DNA的溶液。

DNA分子在生理pH條件下帶負(fù)電荷，而磷酸鈣帶正電荷，通過靜電作用，DNA與磷酸鈣結(jié)合。

形成DNA-磷酸鈣共沉淀物

當(dāng)DNA與磷酸鈣混合后，會形成DNA-磷酸鈣共沉淀物。這些沉淀物是微小的DNA-磷酸鈣復(fù)合體，它們可以吸附到細(xì)胞表面。

細(xì)胞吸收共沉淀物

將形成的DNA-磷酸鈣共沉淀物添加到待轉(zhuǎn)染的細(xì)胞培養(yǎng)基中。細(xì)胞通過內(nèi)吞作用吸收這些共沉淀物。

DNA進(jìn)入細(xì)胞

內(nèi)吞后的DNA-磷酸鈣復(fù)合體被包裹在內(nèi)吞體內(nèi)，隨后內(nèi)吞體與溶酶體融合，DNA被釋放到細(xì)胞質(zhì)中。

DNA的表達(dá)

釋放到細(xì)胞質(zhì)中的DNA可以通過細(xì)胞的核孔復(fù)合體進(jìn)入細(xì)胞核，進(jìn)行蛋白表達(dá)。

翌圣生物的磷酸鈣法細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑，基于傳統(tǒng)方法優(yōu)化，提高轉(zhuǎn)染效率，減少細(xì)胞毒性，特別適合HEK293、293T和Hela等細(xì)胞系。適用于瞬時和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，即開即用，操作簡便。

產(chǎn)品特點

性能穩(wěn)定：可在2-8℃保存，有效期2年；
轉(zhuǎn)染效率高：在293T細(xì)胞上陽性率高達(dá)95%；
毒性低：對細(xì)胞基本無毒，轉(zhuǎn)染后不影響細(xì)胞正常生長。

結(jié)果展示

6孔板中，使用翌圣磷酸鈣法細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑在293T細(xì)胞上轉(zhuǎn)染GFP質(zhì)粒，按照轉(zhuǎn)染試劑說明書進(jìn)行操作；轉(zhuǎn)染48 h后，熒光倒置顯微鏡下觀察并拍照。結(jié)果顯示，翌圣磷酸鈣法細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑在293T細(xì)胞上的轉(zhuǎn)染效率高達(dá)95%以上。

293T細(xì)胞（6孔板）

操作方法

按照60％左右的密度種植細(xì)胞入培養(yǎng)皿（瓶），細(xì)胞貼壁生長12-24小時后即可準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染；

準(zhǔn)備1.5 mL離心管，按照下表指示，依次加入DNA、HBS和CaCl2；

振蕩混勻后室溫靜置15分鐘；

吹打3－5 次后均勻加到待轉(zhuǎn)染細(xì)胞的培養(yǎng)液中，輕輕搖動培養(yǎng)皿（瓶）；

放置37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)；

轉(zhuǎn)染6小時后換液；

24-48小時檢測目的蛋白質(zhì)的表達(dá)。

不同培養(yǎng)容器試劑使用量（僅供參考）

細(xì)胞培養(yǎng)試劑	6孔板	T-25培養(yǎng)瓶	10 cm平皿
培養(yǎng)基（mL）	2	5	10
DNA（μg）	2	4	7.5
HBS（mL）	0.2	0.5	1
CaCl2（μL）	14	35	70

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品規(guī)格	產(chǎn)品貨號
Hieff Trans®Calcium Phosphate Cell Transfection Kit 磷酸鈣法細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑	200T	40803ES70

相關(guān)產(chǎn)品

產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品規(guī)格	產(chǎn)品貨號
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Hieff Trans®Polybrene(hexadimethrine bromide) 聚凝胺(10 mg/mL)	500 μL/5×500 μL	40804ES76/40804ES86
Hieff Trans® Suspension Cell-Free Liposomal Transfection Reagent轉(zhuǎn)染試劑	100 μL/1 mL	40805ES01/40805ES03
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Hieff Trans® Ultra PEI-AAV Transfection Reagent轉(zhuǎn)染試劑	1 mL /10 mL /100mL	40823ES03/40823ES10 /40823ES60