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5-BrdU 溴化去氧尿苷
| 參考價: | 面議 |
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)- 產(chǎn)品型號
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問次數(shù)：932更新時間：2023-02-10 16:55:39
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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
|---|
產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品描述
5-BrdU 溴化去氧尿苷目前常用的細(xì)胞增殖標(biāo)記物有4種，DNA聚合酶α（DNA polymerase α），增殖細(xì)胞核抗原（Proliferating cell nuclear antigen，PCNA），Ki-67和5-溴脫氧尿嘧|啶核苷（Brdu）。其中Brdu為組織細(xì)胞非內(nèi)源性表達(dá)存在，應(yīng)用相對較廣。Brdu，也稱為溴化去氧尿苷，一種合成的胸苷類似物，在S期可替代胸腺嘧啶核苷選擇性結(jié)合到細(xì)胞DNA中。從而檢測細(xì)胞DNA合成和標(biāo)記細(xì)胞分裂，凋亡等行為。在遺傳研究中Brdu可通過活體注射或細(xì)胞培養(yǎng)加載，然后使用抗Brdu的單克隆抗體進(jìn)行特異性標(biāo)記，ICC或IHC法染色法顯示增殖細(xì)胞。另外，還能同時結(jié)合其它細(xì)胞標(biāo)記物，雙重染色，來判斷增殖細(xì)胞的種類，增殖速度等，對研究細(xì)胞動力學(xué)有著重要意義。
產(chǎn)品性質(zhì)
中文別名（Chinese Synonym） | 5-溴-1-(2-脫氧-β-D-呋喃核糖)尿嘧|啶；5-溴脫氧尿苷；溴化去氧尿苷； |
英文別名（English Synonym） | Br-dU; BUdR; 5-BrdU; 5-Bromodeoxyuridine; |
CAS號（CAS NO.） | 59-14-3 |
分子式（Formula） | C9H11BrN2O5 |
分子量（Molecular Weight） | 307.10 |
外觀（Appearance） | 白色或類白色粉末 |
熔點(diǎn)（Melting Point） | 187-189℃ |
純度（Purity, HPLC） | ≥99% |
溶解性（Solubility） | 溶于1M 氫氧化銨（50 mg/mL），水（高達(dá)10 mg/mL）；溶于DMF，DMSO，水（加熱）（50-100 mg/mL） |
結(jié)構(gòu)式（Structure） |
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運(yùn)輸和保存方法
冰袋運(yùn)輸。-20℃干燥保存，2年有效。
操作步驟
1.Brdu儲存液的準(zhǔn)備
用1X DPBS充分溶解適量的Brdu配置10 mg/mL的母液，過濾除菌后，按照0.5mL/管的量分裝放在-20°C或者-80°C長期保存，避免反復(fù)凍融。Brdu儲存液再融化后，4°C可穩(wěn)定存放一周。
2.體內(nèi)Brdu標(biāo)記
1）腹腔注射法（常用）：無菌的10 mg/mL（溶于DPBS）適合用于體內(nèi)注射用。按照100-200 μL（1-2 mg） Brdu的量腹腔注射到小鼠體內(nèi)。注意：最短在注射后0.5 h后在小腸，胸腺和骨髓瘤處就能檢測到Brdu。而一般在注射后24 h內(nèi)幾乎所有組織都能檢測到Brdu。這個時間可能對于一些快速分化的組織如小腸來說有些久。
2）根據(jù)自身的實(shí)驗(yàn)體系，在合適的時間點(diǎn)處死動物，摘除待研究的組織。使用冰凍切片或者石蠟包埋的方法進(jìn)行組織處理和切片制備。然后進(jìn)入后續(xù)的IHC染色步驟。
3.體外Brdu標(biāo)記（培養(yǎng)原代細(xì)胞或者細(xì)胞系）
注：總的來說，10 μM Brdu（稀釋于培養(yǎng)液）是一個比較合適的方法用來標(biāo)記不同物種來源的原代細(xì)胞或細(xì)胞系。當(dāng)然，建議針對具體的實(shí)驗(yàn)體系優(yōu)化方法。
1）在96孔板上按標(biāo)準(zhǔn)步驟進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，培養(yǎng)時間一般為1-72 h；
2）Brdu工作液的準(zhǔn)備：用組織細(xì)胞培養(yǎng)液按照1:30的比例稀釋儲存液得到1mM Brdu工作液。然后取10 μL 1 mM Brdu溶液直接加入1 mL組織培養(yǎng)液即得到最終工作液。37°C溫?zé)帷?/span>
3）按100 μL/孔Brdu工作液的量進(jìn)行細(xì)胞標(biāo)記，37°C孵育60 min~過夜。同時設(shè)置非Brdu標(biāo)記的細(xì)胞作為陰性對照。注意：最佳的孵育時間取決于細(xì)胞增殖速度以及需要達(dá)到的實(shí)驗(yàn)?zāi)康?。比如，對于快速增殖?xì)胞（如HL-60）有效孵育時間為30-45 min；對于原代細(xì)胞（如未受外源刺激培養(yǎng)的外周血淋巴細(xì)胞）孵育時間可能需要24 h。細(xì)胞密度最好不要超過2x106 cells/mL。
4）制備單細(xì)胞層玻片，使用以下任何一種方法：
a.細(xì)胞離心涂片（cytospin）制備：使用細(xì)胞離|心涂片機(jī)，將100 μL標(biāo)記好的細(xì)胞（濃度為：1-2 x106 cells/mL）直接離心到干凈，無脂肪，poly-L-lysin包被的玻片上，風(fēng)干。
b.細(xì)胞涂片（cell-smear）制備：取一小滴標(biāo)記好的細(xì)胞懸液于干凈，無脂肪，poly-L-lysin包被玻片的一端，然后用第二個干凈玻片將其均勻涂布成一薄層。室溫風(fēng)干。
5）將玻片置于70%冰乙醇放在-20°C下固定20-30 min。
6）PBS清洗細(xì)胞3次，每次5 min。
7）加入1.5M HCl中室溫孵育30 min。注意：DNA的變性對于Brdu染色的成功至關(guān)重要。
8）吸去HCl，PBS清洗2次，每次5 min。
9）進(jìn)入后續(xù)ICC染色步驟。
4. 體外Brdu標(biāo)記（組織薄片）
1）Brdu工作液的準(zhǔn)備：用組織細(xì)胞培養(yǎng)液按照1:30的比例稀釋儲存液得到1 mM Brdu工作液。然后取10 -20 μL 1 mM Brdu溶液直接加入1 mL組織培養(yǎng)液即得到最終工作液。確保有足夠的工作液（37°C溫?zé)幔?span style="color: rgb(60, 80, 108); font-family: 思源雅黑, SimSun; background-color: rgb(255, 255, 255);">全部浸泡組織。
2）用手|術(shù)刀或者鋒利的刀片將組織切割成約1 mm厚，2 mm2大小的薄片。建議在溫?zé)岬呐囵B(yǎng)基內(nèi)進(jìn)行切片，利于維持組織的活力。
3）轉(zhuǎn)移組織薄片至預(yù)裝有10 mL Brdu標(biāo)記液的15 mL離心管內(nèi)。于37°，CO2 培養(yǎng)箱內(nèi)孵育需要的時間。孵育時間可變，取決于組織薄片類型以及需要達(dá)到的實(shí)驗(yàn)?zāi)康模ǔＳ玫臑?-4 h）。直接丟棄未用完的標(biāo)記液。
4）37°C PBS清洗組織薄片，每次5 min。
5）使用標(biāo)準(zhǔn)的冰凍切片或者石蠟包埋切片的方法固定組織。
HB210525
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