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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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Alexa Fluor 647/PI細(xì)胞凋亡檢測試劑盒
| 參考價(jià): | 面議 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)- 產(chǎn)品型號
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問次數(shù)：935更新時(shí)間：2023-02-28 15:52:10
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- www.yeasen.com
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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 貨號 | 40304ES20 |
|---|---|---|---|
| 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè),制藥 |
產(chǎn)品介紹
Annexin V-Alexa Fluor 647/PI細(xì)胞凋亡檢測試劑盒
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 儲存 | 價(jià)格（元） |
Annexin V-Alexa Fluor 647/PI 凋亡檢測試劑盒 | 40304ES20 | 20T | 4℃ | 518.00 |
Annexin V-Alexa Fluor 647/PI 凋亡檢測試劑盒 | 40304ES50 | 50T | 4℃ | 1120.00 |
Annexin V-Alexa Fluor 647/PI 凋亡檢測試劑盒 | 40304ES60 | 100T | 4℃ | 1960.00 |
產(chǎn)品描述
Annexin V-Alexa Fluor 647/PI細(xì)胞凋亡檢測試劑盒（Annexin V-Alexa Fluor 647/PI Apoptosis Detection Kit）是用Alexa Fluor 647標(biāo)記了的Annexin V作為探針，來檢測細(xì)胞早期凋亡的發(fā)生，可用流式細(xì)胞儀或其他熒光檢測設(shè)備進(jìn)行檢測。
其檢測原理為：在正常的活細(xì)胞中，磷脂酰絲-氨酸（phosphotidylserine，PS）位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)，但在早期凋亡的細(xì)胞中，PS 從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面，暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。Annexin-Ⅴ（膜聯(lián)蛋白-V）是一種分子量為35-36KD的Ca2+ 依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與PS高親和力結(jié)合。可通過細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲-氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。
另外，本試劑盒中還提供了碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）用來區(qū)分存活的早期細(xì)胞和壞死或晚期凋亡細(xì)胞。PI是一種核酸染料，它不能透過正常細(xì)胞或早期凋亡細(xì)胞的完整的細(xì)胞膜，但可以透過凋亡晚期和壞死細(xì)胞的細(xì)胞膜而使細(xì)胞核染紅。因此，將Annexin V與PI聯(lián)合使用時(shí)，PI 則被排除在活細(xì)胞（Annexin V-/PI-）和早期凋亡細(xì)胞（Annexin V+/PI-）之外，而晚期凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞同時(shí)被Alexa Fluor 647 和PI 結(jié)合染色呈現(xiàn)雙陽性（Annexin V+/PI+）。
產(chǎn)品組分
編號 | 組分 | 產(chǎn)品編號/規(guī)格 | ||
40304ES20（20T） | 40304ES50（50T） | 40304ES60（100T） | ||
40304-A | Annexin V-Alexa Fluor 647 | 100 μl | 250 μl | 500 μl |
40304-B | PI Staining Solution (20 μg/ml) | 200 μl | 500 μl | 1.0 ml |
40304-C | 4×Binding Buffer | 4 ml | 10 ml | 20 ml |
運(yùn)輸與保存方法
冰袋（wet ice）運(yùn)輸。本試劑盒中所有組分均在4℃保存，Annexin V-Alexa Fluor 647、PI需避光保存。
使用說明
1.1 樣品染色
a) 懸浮細(xì)胞：300g，4℃離心5 min收集細(xì)胞。
b) 貼壁細(xì)胞：用不含EDTA的胰-酶消化后，300g，4℃離心5 min收集細(xì)胞。胰-酶消化時(shí)間不宜過長，以防引起假陽性。
配制1×Binding Buffer：用去離子水按1:4 稀釋4×Binding Buffer（4ml 結(jié)合緩沖液+12ml 去離子水）。
用預(yù)冷的PBS洗滌細(xì)胞2次，每次均需300g，4℃離心5 min。
加入250 μl 1×Binding Buffer重懸細(xì)胞，調(diào)節(jié)其濃度為1×106/ml。
取100 μl細(xì)胞懸液于5ml流式管中，加入5μl Annexin V-Alexa Fluor 647和10 μl PI，輕輕混勻。
避光、室溫反應(yīng)15 min。
加入400 μl PBS，混勻，樣品在1小時(shí)內(nèi)用流式細(xì)胞儀檢測。
注意：為了避免洗滌細(xì)胞時(shí)損失細(xì)胞，在吸液時(shí)可以用大的Tip頭套上小的Tip頭吸液。
1.2 流式細(xì)胞儀分析
Alexa Fluor 647zui大激發(fā)波長為651 nm，zui大發(fā)射波長為667 nm；PI-DNA復(fù)合物的zui大激發(fā)波長為535 nm，zui大發(fā)射波長為615 nm。用CellQuest等軟件進(jìn)行分析，繪制雙色散點(diǎn)圖（two-color dot plot），Alexa Fluor 647為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。每個樣采集10，000 events。
注意事項(xiàng)
由于細(xì)胞凋亡是一個快速的過程，建議樣品在染色后1小時(shí)之內(nèi)進(jìn)行分析。
對于貼壁細(xì)胞，消化是一個關(guān)鍵步驟。貼壁細(xì)胞誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡時(shí)如有漂浮細(xì)胞，需收集漂浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞后合并染色。處理貼壁細(xì)胞時(shí)要小心操作，盡量避免人為的損傷細(xì)胞。胰-酶消化時(shí)間過短，細(xì)胞需要用力吹打才能脫落，容易造成細(xì)胞膜的損傷，PI攝入過多；消化時(shí)間過長，細(xì)胞膜同樣易造成損傷，甚至?xí)绊懠?xì)胞膜上磷脂酰絲-氨酸與Annexin V-Alexa Fluor 647的結(jié)合。消化時(shí)將胰-酶鋪滿孔板底后，輕搖時(shí)胰-酶與細(xì)胞充分接觸，然后倒掉大部分胰-酶，利用剩余的少量胰-酶再消化一段時(shí)間，待細(xì)胞間空隙增大，瓶底呈花斑狀即可終止。在消化液中盡量不用EDTA，EDTA會影響Annexin V與PS的結(jié)合。
如果樣品來源于血液，請務(wù)必除去血液中的血小板。因?yàn)檠“搴?/span>PS，能與Annexin V結(jié)合，從而干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果?？梢允褂煤?/span>EDTA的緩沖劑并在200 g離心洗去血小板。
試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。
Annexin V-Alexa Fluor 647和PI是光敏物質(zhì)，在操作時(shí)請注意避光。
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