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- 40719ES50 產(chǎn)品型號
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問次數(shù):3867更新時間:2022-10-28 16:40:59
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
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產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 儲存 | 價格(元) | *(元) |
鈣黃綠素 Calcein AM超純級 | 40719ES50 | 1×50 μg | -20℃干燥保存 | 199.00 | 189.00 |
40719ES60 | 2×50 μg | -20℃干燥保存 | 369.00 | 350.00 | |
40719ES74 | 20×50 μg | -20℃干燥保存 | 3287.00 | / | |
40719ES80 | 1 mg | -20℃干燥保存 | 2637.00 | / |
產(chǎn)品描述
鈣黃綠素 Calcein AM超純級是一種對活細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記的細(xì)胞染色試劑,發(fā)綠色熒光(Ex=490 nm,Em=515 nm)。 因其在傳統(tǒng)的Calcein(鈣黃綠素)基礎(chǔ)上引入乙酰甲氧基甲酯(AM)基團(tuán),增加了疏水性,使其能夠輕易穿透活細(xì)胞膜。一旦進(jìn)入細(xì)胞后,Calcein-AM(本身不發(fā)熒光)被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成膜非滲透性的極性分子Calcein,從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)并發(fā)出強(qiáng)綠色熒光。與其它同類試劑(如BCECF-AM和CFDA)相比,由于Calcein, AM細(xì)胞毒性極低,適合用于活細(xì)胞染色的熒光探針,而且不會抑制任何的細(xì)胞功能,如增殖和淋巴球的趨化性。
由于死細(xì)胞缺乏酯酶,鈣黃綠素 Calcein AM超純級僅用于對活細(xì)胞的細(xì)胞生存能力測試和短期標(biāo)記。作為核染色染料的碘化丙啶不能穿過活細(xì)胞的細(xì)胞膜,它穿過死細(xì)胞膜的無序區(qū)域而到達(dá)細(xì)胞核,并嵌入細(xì)胞的DNA雙螺旋從而產(chǎn)生紅色熒光(激發(fā):535 nm,發(fā)射:617 nm),因此PI僅對死細(xì)胞染色。由于Calcein和PI-DNA都可被490 nm激發(fā),因此可用熒光顯微鏡同時觀察活細(xì)胞和死細(xì)胞。而用545 nm激發(fā),僅可觀察到死細(xì)胞。根據(jù)以上特點(diǎn),Calcein, AM和PI經(jīng)常被結(jié)合用來作為活細(xì)胞和死細(xì)胞的雙重染色。由于不同細(xì)胞系的染色條件不同,我們建議個別確定 Calcein, AM 和 PI的合適濃度。
本品為粉末形式提供的Calcein-AM,超純級別(≥95%),可與碘化丙啶(PI)(Cat No. 40710ES03)聯(lián)合使用,用于活細(xì)胞和死細(xì)胞的同時檢測?;蛘咧苯淤徺I翊圣提供的Calcein-AM/PI活細(xì)胞/死細(xì)胞雙染試劑盒(Cat No. 40747ES76)。
產(chǎn)品性質(zhì)
中文名稱(Chinese synonym) | 3-O-乙酰胺-2,7-二(羧乙基)-4或5-羧基熒光素,二乙酰甲酯;鈣黃綠素乙酰甲酯; |
英文名稱(English synonym) | 3,6-Di(O-acetyl)-4,5-bis[N,N-bis(carboxymethyl)aminomethyl]fluorescein, tetraacetoxymethyl ester |
CAS號( CAS NO) | 148504-34-1 |
分子式(Formula) | C46H46N2O23 |
分子量(Mol. Wt.) | 994.86 |
純度(Purity) | ≥95%(HPLC) |
Ex/ Em(nm) | 490/515 |
結(jié)構(gòu)式 | |
運(yùn)輸與保存方法
冰袋(wet ice)運(yùn)輸。-20℃干燥保存,避免直接暴露于強(qiáng)光下,有效期一年。
注意事項(xiàng)
1)對于微量試劑,開封前,請稍微離心一下,以保證粉末落入管底。
2)由于Calcein-AM對濕度非常敏感,本粉末保存的過程中一定要保持干燥。對于配制好的Calcein-AM儲存液需要分裝凍存,且必須緊緊密封蓋子,干燥保存。Calcein-AM工作液必須現(xiàn)配現(xiàn)用。
3)為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
4) 本產(chǎn)品僅作科研用途!
使用方法
1. 儲存液的配制
本品是以粉末形式提供的,根據(jù)工作液的濃度將其配制成1000×的儲存液,儲存液配制范圍可為1~50 mM。例如使用的工作液為5 μM,那么可配制5 mM的儲存液,也就是向50 μg Calcein, AM(Mw:994.86)內(nèi)加入10 μl 細(xì)胞培養(yǎng)級別的DMSO(CAS NO. 60313ES60)即可得到所需濃度的儲存液。
2. 染色步驟
對于大部分細(xì)胞,鈣黃綠素Calcein, AM的工作液濃度為2-5 μM。由于不同細(xì)胞系的染色條件不同,初次實(shí)驗(yàn)建議做梯度實(shí)驗(yàn),以確定 Calcein-AM的適濃度。梯度篩選的原則為使用較低的探針濃度得到更好的熒光結(jié)果。
1)使用時,取一管適量的Calcein, AM儲存液(1000×),用PBS(或Hanks和Hepes)緩沖液將其稀釋成相應(yīng)濃度的染色工作液。
注:有時候可添加一定量的非離子表面活性劑如Pluronic F127(Cat No. 60318ES60)到Calcein AM儲存液內(nèi)來增強(qiáng)其水溶性。制備染色工作液前,取一管需要用的Calcein AM儲存液內(nèi)加入等體積的20% Pluronic F127,使Pluronic F127的終濃度為0.02%。含Pluronic F127的Calcein AM溶液不可長期保存,現(xiàn)配現(xiàn)用。
2)對于貼壁細(xì)胞,先用EDTA消化細(xì)胞,離心收集細(xì)胞(1000 rpm,3 min)。對于懸浮細(xì)胞,直接離心收集細(xì)胞。
3)去上清,用PBS(或者其他緩沖液)充分清洗細(xì)胞2~3次,以充分去除殘留的酯酶活性。
4)用1/10細(xì)胞培養(yǎng)基體積的Calcein, AM染色工作液重懸細(xì)胞,37℃培養(yǎng)細(xì)胞15~30分鐘。
注:如果細(xì)胞本身含有有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)體,需加probenecid,1-2.5 mM或者苯磺唑酮(sulfinpyrazone,0.1-0.25 mM)到孵育體系內(nèi)以降低去酯化染料calcein泄露到胞外。
5)用PBS(或者其他緩沖液)洗滌細(xì)胞兩次去除多余的染料。
注:如有必要,使用含有陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑的緩沖液來進(jìn)行細(xì)胞清洗。
6)用含490 nm激發(fā)波長,515 nm發(fā)射波長的濾光片的熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。
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HB170518