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產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

翊圣SuperSignal MaxiSignal Maximum Sensitivity Substrate用于檢測直接或間接標(biāo)記辣根過氧化物酶（HRP）的抗體及其關(guān)聯(lián)的抗原。其原理是，蛋白質(zhì)或核酸在電泳后轉(zhuǎn)移到印跡膜上，以一抗及HRP標(biāo)記的二抗結(jié)合膜上的目的蛋白，或以HRP標(biāo)記的探針直接或間接結(jié)合膜上的核酸。洗膜后用本產(chǎn)品配制的ECL工作液，室溫孵育膜數(shù)分鐘，將印跡膜用保鮮膜包被粘貼固定于X光片曝光暗盒。然后轉(zhuǎn)入暗室將X光膠片壓在膜上曝光數(shù)秒到數(shù)小時(shí)，顯影定影后蛋白質(zhì)或核酸條帶可清晰顯示在X光膠片上。

本試劑盒采用了*的發(fā)光/增強(qiáng)底物系統(tǒng)，降低曝光背景的同時(shí)引入新型的氧化劑，大大提高試劑盒的穩(wěn)定性，可實(shí)現(xiàn)低飛克級的免疫印跡檢測。除用于X光片，還可用于自動(dòng)成像系統(tǒng)。

產(chǎn)品特點(diǎn)

1）具有*靈敏度和高信噪比，可檢測低飛克級抗原；

2）持續(xù)發(fā)光時(shí)間長，熒光可使X光膠片感光達(dá)8小時(shí)以上，特別適用于痕量蛋白或核酸檢測；

3）可使用更高的抗體稀釋倍數(shù)，大大節(jié)省抗體：

一抗（儲液濃度1mg/ml）稀釋倍數(shù)：1:5000-1:100000；

二抗（儲液濃度1mg/ml）稀釋倍數(shù)：1:100,000-1:500,000。

產(chǎn)品組分

運(yùn)輸與保存方法

常溫運(yùn)輸。4 oC保存。【注】：A液（36224-A）需避光保存！有效期1年。

操作方法

【較理想的Western blot 結(jié)果需要優(yōu)化所涉及的各個(gè)實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)，如樣品上樣量、凝膠類型、轉(zhuǎn)膜方法、膜類型、封閉試劑、一抗?jié)舛?、二抗?jié)舛燃跋鄳?yīng)孵育時(shí)間等。另外，每個(gè)環(huán)節(jié)盡量提供足量的孵育試劑，以避免膜干燥?！?/span>

1. 執(zhí)行常規(guī)電泳、轉(zhuǎn)膜、HRP標(biāo)記抗體或者HRP標(biāo)記核酸探針孵育、洗膜。

【注】：ECL發(fā)光液是HRP的顯色底物，因此檢測系統(tǒng)zui終必須基于HRP酶標(biāo)記抗體或者核酸探針。

2. zui后一次洗膜的同時(shí)，新鮮配制發(fā)光工作液：分別取等體積的A液和B液，混勻后，室溫放置備用。

【注】：取A液和B液一定要用不同的槍頭；

3. 用平頭鑷取出膜，搭在濾紙上瀝干洗液，勿使膜*干燥。將膜*浸入發(fā)光工作液（100~200μl發(fā)光工作液/cm²膜）中，與發(fā)光工作液充分接觸。室溫孵育3-5分鐘，準(zhǔn)備立即壓片曝光。

【注】：孵育時(shí)間過長不會增加靈敏度，有時(shí)還會導(dǎo)致曝光條帶異常。發(fā)光過程的本質(zhì)是酶促反應(yīng)，使用過少的發(fā)光工作液不利反應(yīng)進(jìn)行，也會導(dǎo)致膜上條帶曝光不均和明顯降低靈敏度。為達(dá)節(jié)約目的可將膜剪小，但勿降低發(fā)光液使用比例。

4. 用平頭鑷子夾起膜，膜的下緣輕輕接觸吸水紙，去除膜上多余的液體，留下少量工作液，不可讓膜*干燥。不可洗去發(fā)光液。

5. 在X光膠片暗盒內(nèi)表面鋪一張面積大于膜的保鮮膜。將印跡膜貼在保鮮膜上，將保鮮膜折起來*包裹印跡膜，去除氣泡和皺褶，可剪去邊緣部多余的保鮮膜。用濾紙吸去多余的發(fā)光工作液。用膠帶將覆蓋印跡膜的保鮮膜固定在暗盒內(nèi)，蛋白帶面向上。

6. 暗房內(nèi)取一張X光膠片至于包裹的膜上，壓片，分別曝光不同的時(shí)間，如數(shù)秒到數(shù)分鐘，定影顯影沖洗?！咀ⅰ浚浩毓鈺r(shí)間需根據(jù)曝光強(qiáng)度做相應(yīng)的調(diào)整。若是背景過高，可使用兩張X光膠片同時(shí)壓片。

注意事項(xiàng)

1）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

2）步驟1～5可在日光燈下操作；但發(fā)光液曝露于強(qiáng)光下時(shí)間過久靈敏度可能略有降低，移到暗房操作可避免。戴手套可以避免在膜上留下手印，保持膜的干凈。

3）長時(shí)間曝光或蛋白過量，將加深背景并使條帶強(qiáng)弱變化失去線性關(guān)系。曝光不足則條帶模糊。

4）發(fā)光工作液孵育約3-5分鐘后膜上的條帶發(fā)光。強(qiáng)條帶發(fā)光在暗房中肉眼可見，低豐度蛋白條帶發(fā)光較弱甚至肉眼不可見但可使X光膠片曝光。不能簡單以肉眼觀察判斷條帶發(fā)光時(shí)間。肉眼不可見的熒光實(shí)際上可持續(xù)數(shù)小時(shí)并使X光膠片感光，因此弱帶可曝光1-10小時(shí)。如果曝光后條帶不佳，可用洗膜緩沖液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用ECL發(fā)光和曝光。

5）由于發(fā)光液靈敏度高，強(qiáng)烈推薦大多數(shù)進(jìn)口抗體起始濃度為一抗（儲液濃度1mg/ml）稀釋倍數(shù)：1:5000-1:100000；二抗（儲液濃度1mg/ml）稀釋倍數(shù)：1:100,000-1:500,000。抗體濃度過高將造成高背景或沒有條帶，導(dǎo)致失敗。

6）某些保鮮膜包裹印跡膜時(shí)可能會淬滅熒光，應(yīng)選擇高質(zhì)量保鮮膜。

7）避免將多張膜置于同一個(gè)洗膜盒內(nèi)洗膜，相互吸附或摩擦可能造成很深的背景。

8）使用肉眼可見的預(yù)染色蛋白Marker和熒光-放射自顯影曝光標(biāo)簽可精確確定膠片上條帶的位置和大小。

9）使用生物素-親和素系統(tǒng)，避免使用牛奶封閉，可能會導(dǎo)致背景過高。

10）金屬氧化物顆?？赡軙斐赡ど铣霈F(xiàn)顆粒狀斑點(diǎn)，避免使用帶有銹跡的剪刀以及鑷子，建議使用塑料的平頭鑷子。

11）（NaN₃）能抑制HRP活性，若回收HRP標(biāo)記探針或者抗體應(yīng)避免使用NaN₃。

12）本品無特殊毒性，按普通化學(xué)品處理。

附 常見問題及解答

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