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100次Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit
| 參考價: | 面議 |
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)- 100次 產(chǎn)品型號
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問次數(shù)：1297更新時間：2023-03-15 09:07:32
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產(chǎn)品簡介
產(chǎn)品介紹
HB170227
Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit
細(xì)胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 儲存 | 價格（元） |
Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit 細(xì)胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒 | 40754ES60 | 100次 | -20℃ | 780.00 |
產(chǎn)品描述
細(xì)胞衰老（Cell senescence）是細(xì)胞控制其生長潛能的保障機(jī)制，一般含義是復(fù)制衰老（Replicative senescence，RS），指正常細(xì)胞經(jīng)過有限次數(shù)的分裂后，停止分裂，此時細(xì)胞雖然是存活的，但是細(xì)胞形態(tài)和生理代謝活性發(fā)生明顯變化的現(xiàn)象。體外衰老細(xì)胞研究常用的生物學(xué)特征包括：1）不可逆的生長停滯；2）與衰老相關(guān)的β-半乳糖苷酶（senescence associated β-galactosidase, SA-β-gal）的活化。作為溶酶體內(nèi)的水解酶，通常在pH 4.0的條件下表現(xiàn)活性，但是衰老細(xì)胞內(nèi)其在pH 6.0的條件下表現(xiàn)活性，且隨著傳代次數(shù)的增加，細(xì)胞群體中表現(xiàn)衰老相關(guān)的β-半乳糖苷酶的細(xì)胞數(shù)目逐漸增加。
本試劑盒正是基于SA -β-gal活性變化的生物學(xué)特征而設(shè)計的，以X-Gal為底物，在衰老特異性的β-半乳糖苷酶催化下生成深藍(lán)色產(chǎn)物，從而在光學(xué)顯微鏡下觀察顏色變化以分析細(xì)胞的衰老狀況。
本試劑盒可以培養(yǎng)細(xì)胞的衰老檢測，也可以用于組織切片的衰老檢測。產(chǎn)品性能穩(wěn)定，參數(shù)經(jīng)優(yōu)化，著色敏感，特異性高。僅對衰老細(xì)胞進(jìn)行染色，不會染色衰老前的細(xì)胞（presenescent cells）、靜止期細(xì)胞（quiescent cells）、永生細(xì)胞（immortal cells）或腫瘤細(xì)胞。
產(chǎn)品組分
組分編號 | 組分名稱 | 規(guī)格 | 保存 |
40754-A | β-半乳糖苷酶染色液A | 1 ml | -20℃保存 |
40754-B | β-半乳糖苷酶染色液B | 1 ml | -20℃保存 |
40754-C | β-半乳糖苷酶染色液C | 100ml | -20℃保存 |
40754-D | β-半乳糖苷酶染色固定液 | 100 ml | -20℃保存 |
40754-E | X-Gal溶液 | 5 ml | -20℃避光保存 |
運(yùn)輸與保存方法
冰袋運(yùn)輸。-20℃保存，一年有效，其中X-Gal溶液需避光保存。
注意事項
1）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
2）本試劑盒β-半乳糖苷酶染色固定液存在一定的腐蝕性和毒性，操作時請注意小心防護(hù)。
3）細(xì)胞衰老β-半乳糖苷酶染色反應(yīng)依賴于特定的pH值，不能用于細(xì)胞培養(yǎng)的CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行染色反應(yīng)。因為CO2培養(yǎng)箱中較高濃度的CO2會影響染色工作液的pH值，導(dǎo)致染色失敗。
4）40754-B剛?cè)芙夂髸^察到有沉淀，屬正?，F(xiàn)象，充分混勻或者漩渦震蕩可促使沉淀全部溶解，之后才能用于染色實驗。配置染色工作液時，也可能有少量絮狀沉淀出現(xiàn)，震蕩混勻后就會*溶解。在染色前一定要確保所有的試劑處于*溶解狀態(tài)。
5）X-Gal溶液需要避光保存。染色工作液也需要避免光照。染色后的細(xì)胞樣品可以在4ºC冰箱保存，但也需避免光照。
使用方法
- 實驗前的準(zhǔn)備工作：
- 染色工作液配制
實驗開始前，將試劑盒內(nèi)各組分從冰箱內(nèi)取出，*溶解。其中X-Gal溶液置入冰槽里等待溶化。根據(jù)表1進(jìn)行染色工作液的配置，實驗體系類型，檢測樣本數(shù)，統(tǒng)一配制單次實驗需要的染色工作液總量。
- 1 染色工作液配方表
β-半乳糖苷酶染色液A | 10μl |
β-半乳糖苷酶染色液B | 10μl |
β-半乳糖苷酶染色液C | 930μl |
X-Gal溶液 | 50μl |
【注】配制染色工作液時需使用聚丙烯（polypropylene）容器或玻璃容器，不宜使用聚苯乙烯（polystyrene）容器，對于二者的判定：聚丙烯容器可高壓滅菌，而聚苯乙烯容器則不可高壓滅菌，一旦高溫高壓處理就會嚴(yán)重變形。但是染色過程可以在聚苯乙烯容器內(nèi)進(jìn)行，如細(xì)胞培養(yǎng)常用的6孔板。
- 6孔細(xì)胞培養(yǎng)板染色（貼壁細(xì)胞）：
1）吸除細(xì)胞培養(yǎng)液，用PBS/HBSS洗滌細(xì)胞1次，加入1mlβ-半乳糖苷酶染色固定液。室溫固定15min。
2）吸除固定液，用PBS/HBSS洗滌細(xì)胞3次，每次3min。
3）吸除PBS/HBSS，每孔加入1ml預(yù)熱的染色工作液，覆蓋整個生長表面。
4）37℃孵育過一晚上，可以用封口膜或保鮮膜封住6孔板防止液體蒸發(fā)。
- 37℃孵育不能在CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行，因其內(nèi)高濃度的CO2會影響染色工作液的pH值，導(dǎo)致染色失敗。
5）普通光學(xué)顯微鏡下觀察和計數(shù)：表達(dá)SA β-gal的細(xì)胞為陽性細(xì)胞，呈現(xiàn)藍(lán)色。如不能及時觀察計數(shù)，可以去除染色工作液，加入2ml PBS緩沖液，4℃可以保存數(shù)天，或者加入封片劑封片后，4℃可保存較長時間。
- 懸浮細(xì)胞染色：
1）離心收集細(xì)胞至1.5ml離心管內(nèi)，用PBS/HBSS洗滌1次，加入1mlβ-半乳糖苷酶染色固定液。室溫固定15min。固定時可以在搖床上緩慢搖動，以避免細(xì)胞結(jié)成團(tuán)塊。
2）離心，吸除細(xì)胞固定液，用PBS/HBSS洗滌細(xì)胞3次，每次3min。
3）離心，吸除PBS/HBSS，每管加入0.5-1ml預(yù)熱的染色工作液。染色工作液的配制方法參見表1。
4）37℃孵育過一晚上。
【注】37℃孵育不能在CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行，因其內(nèi)高濃度的CO2會影響染色工作液的pH值，導(dǎo)致染色失敗。
5）取部分染色好的細(xì)胞，滴加到載玻片上或6孔板內(nèi)，普通光學(xué)顯微鏡下觀察和計數(shù)。如不能及時觀察計數(shù)，可以離心，去除染色工作液，加入1ml PBS緩沖液，4℃可以保存數(shù)天。也可取細(xì)胞用于涂片，加上封片劑封片后，4℃可保存較長時間。
- 組織切片染色：
1）對于石蠟切片先按照常規(guī)方法進(jìn)行脫蠟或水化處理。對于冰凍切片直接按照以下步驟進(jìn)行；
2）加入適當(dāng)體積的β-半乳糖苷酶染色固定液，以充分蓋住組織為宜，室溫固定不少于15min。
3）用PBS浸泡洗滌組織3次，每次不少于5min；
4）吸除PBS，加入適當(dāng)量的預(yù)熱的染色工作液。染色工作液的配制方法參見表1。
5）37℃孵育過一晚上，可以用封口膜或保鮮膜封住防止蒸發(fā)，把整個切片浸泡在染色工作液中。
- 37℃孵育不能在CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行，因其內(nèi)高濃度的CO2會影響染色工作液的pH值，導(dǎo)致染色失敗。
6）普通光學(xué)顯微鏡下觀察和計數(shù)。如不能及時觀察計數(shù)，加上封片劑封片后4℃可保存較長時間。
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