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11119ES60Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit
| 參考價(jià): | 面議 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)- 11119ES60 產(chǎn)品型號(hào)
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問(wèn)次數(shù)：2660更新時(shí)間：2021-07-23 10:36:09
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 貨號(hào) | 11119ES60 |
|---|---|---|---|
| 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 儲(chǔ)存 | 價(jià)格（元） |
Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit | 11119ES60 | 100 T | -20℃ | 755.00 |
產(chǎn)品描述
Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit是基于Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase開(kāi)發(fā)的試劑盒。與Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比，Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase熱穩(wěn)定性大幅度提高，可耐受高達(dá)50℃的反應(yīng)溫度，適合具有復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)的RNA模板的逆轉(zhuǎn)錄。同時(shí)，該酶增強(qiáng)了與模板的親和力，適合少量模板以及低拷貝基因的逆轉(zhuǎn)錄。Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase合成全長(zhǎng)cDNA的能力也有了提升，可擴(kuò)增長(zhǎng)達(dá)10 kb的cDNA。
試劑盒中包含由總RNA或mRNA合成第一鏈cDNA所需的所有成分，并提供兩種cDNA合成引物：Random Primers N6和oligo (dT)18，合成的單鏈cDNA產(chǎn)物可直接用來(lái)進(jìn)行后續(xù)PCR或者qPCR反應(yīng)。
產(chǎn)品組分
編號(hào) | 組分 | 產(chǎn)品編號(hào)/規(guī)格 |
11119ES60 (100 T) | ||
11119-A | RNase-free H2O | 2×1 mL |
11119-B | 5×Hifair® Ⅱ Buffer | 400 μL |
11119-C | Hifair® Ⅱ Enzyme Mix | 200 μL |
11119-D | Oligo (dT)18 (50 μM) | 100 μL |
11119-E | Random Primers N6 (50 μM) | 100 μL |
【注】：1）5×Hifair® Ⅱ Buffer中包含dNTP。2）Hifair® Ⅱ Enzyme Mix中包含RNase inhibitor。
運(yùn)輸和保存方法
冰袋運(yùn)輸。-20℃保存。
注意事項(xiàng)
1）反應(yīng)液的配制應(yīng)在冰上操作完成，操作過(guò)程應(yīng)避免RNase污染；
2) 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
3）本產(chǎn)品僅作科研用途！
第一鏈cDNA合成操作步驟
1. 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系配制（20 μL體系）
組分 | 使用量 |
RNase-free H2O | To 20 μL |
Total RNA | 1 ng -5 μg* |
or mRNA | 1 ng-500 ng* |
5×Hifair® Ⅱ Buffer | 4 μL |
Random Primers N6 (50 μM) | 1 μL |
or Oligo (dT)18 (50 μM) | or 1 μL |
or Gene Specific Primers (2 μM) | or 1 μL |
Hifair® Ⅱ Enzyme Mix | 2 μL |
【可省略】：若后續(xù)實(shí)驗(yàn)為PCR，針對(duì)復(fù)雜模板，可將RNA、H2O、反轉(zhuǎn)錄引物在65℃孵育5 min 后，迅速冰上冷卻，然后再加入Hifair® Ⅱ Enzyme Mix；若后續(xù)實(shí)驗(yàn)為qPCR，則可省略65℃孵育步驟，直接在體系中加入Hifair® Ⅱ Enzyme Mix。
【注】：* 若后續(xù)實(shí)驗(yàn)為qPCR，建議Total RNA 或 mRNA投入量不超過(guò)1 μg或100 ng，如果目的基因的表達(dá)豐度非常低，最多可投入5 μg Total RNA或500 ng mRNA。
2. 逆轉(zhuǎn)錄程序設(shè)置
溫度 | 時(shí)間 |
25℃ | 5 min |
42℃ | 30 min |
85℃ | 5 min |
【注】：
1）熒光定量實(shí)驗(yàn)可以只使用Random Primers N6；也可以1:1與Oligo (dT)18混合使用，效果更好。
2）逆轉(zhuǎn)錄溫度：推薦使用42℃。對(duì)于高GC含量模板或者復(fù)雜模板，可將逆轉(zhuǎn)錄溫度提高到50℃。
3）逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可以-20℃短期保存，若需長(zhǎng)期保存，建議分裝后，于-80℃保存，避免反復(fù)凍融。
關(guān)于引物的選擇
1） 如果模板為真核生物來(lái)源，建議選擇Oligo (dT)18 ，與真核生物mRNA的3’ Poly A尾配對(duì)，可獲得最高產(chǎn)量的全長(zhǎng)cDNA。
2）原核生物RNA的反轉(zhuǎn)錄請(qǐng)選用Random Primers N6或者基因特異性引物。
3）Random Primers N6適用性較廣，mRNA、rRNA、tRNA、small RNA和LncRNA等模板均可用Random Primers N6進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。
4）使用Random primers N6，進(jìn)行2 kb以下的cDNA合成時(shí)，Random primers N6的使用量為 1-2 μL；2 kb 以上的cDNA合成時(shí)，Random primers N6 的使用量為0.4-1 μL。
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