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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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40703ES50Fluo-3, AM鈣離子探針
| 參考價: | 面議 |
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)- 40703ES50 產(chǎn)品型號
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問次數(shù)：1193更新時間：2022-04-08 15:40:16
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- www.yeasen.com
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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50μg |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 40703ES50 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品介紹
Fluo-3, AM, Cell Permeant細(xì)胞膜可滲透鈣離子熒光探針
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 儲存 | 價格 |
Fluo-3, AM (Powder) , Cell Permeant Fluo-3,AM鈣離子探針 | 40703ES50 | 50μg | -20℃干燥避光 | 276.00 |
Fluo-3, AM (Powder) , Cell Permeant Fluo-3, AM鈣離子探針 | 40703ES72 | 5×50μg | -20℃干燥避光 | 976.00 |
Fluo-3, AM (Powder) , Cell Permeant Fluo-3, AM鈣離子探針 | 40703ES80 | 1mg | -20℃干燥避光 | 2576.00 |
產(chǎn)品描述
Fluo-3, AM是一種常用的檢測細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的熒光探針。Fluo-3, AM鈣離子探針穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞后被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成Fluo-3，從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)。Fluo-3游離配體幾乎是非熒光性的，其熒光不會隨鈣離子濃度升高而增強。但是，當(dāng)它與細(xì)胞內(nèi)鈣離子結(jié)合后可以產(chǎn)生較強的熒光，熒光會增加60至80倍，zui大激發(fā)波長為 506nm，zui大發(fā)射波長為 526nm。實際檢測時推薦使用的激發(fā)波長為488nm左右，發(fā)射波長為 525～530nm。可以使用激光共聚焦顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的變化。
本產(chǎn)品以粉末形式提供，使用時可用高質(zhì)量無水DMSO配制成2-5mM的儲存液分裝保存。
產(chǎn)品性質(zhì)
中文名稱（Chinese Synonym） | 鈣熒光探針Fluo-3, AM |
CAS 號（CAS NO.） | 121714-22-5 |
分子式（Molecular Fomular） | C51H50Cl2N2O23 |
分子量（Molecular Weight） | 1129.85 |
Ex/Em（nm, Ca2+-bound） | 506/526 |
純度（Purity） | ≥90% (HPLC) |
外觀（Appearance） | 紅色粉末 |
結(jié)構(gòu)式（Structure） |
|
運輸與保存方法
室溫運輸。粉末-20℃干燥避光保存，有效期一年。
注意事項
1）熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。
2）乙酰氧基甲基酯（Acetoxymethyl ester，AM）容易吸潮，從冰箱取出后，請確認(rèn)在干燥的環(huán)境放至室溫后再開封。由于試劑極其微量，開封前請將其短暫離心，以保證粉末落入管底。
3）*次使用時，建議母液現(xiàn)配現(xiàn)用。且溶解后的試劑盡可能在短時間內(nèi)使用，以保證實驗效果。
4）母液遇水極易分解，若單次不能用完，建議分裝保存，例如5μl/管，用封口膜封口，并嚴(yán)格做到≤-20℃密封干燥保存。
5）建議您在正式實驗前先摸索一下細(xì)胞量、鈣離子熒光探針的終濃度、培養(yǎng)時間等，找到*實驗條件。
6）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
試劑準(zhǔn)備
1）配制Pluronic F-127母液：100mg Pluronic F-127粉末（Cat No. 60318ES60）中加入0.5mL DMSO，配制成20%(w/v)的DMSO母液。溶解過程需要在40-50℃加熱20-30min。溶液室溫保存，不要冷藏。如果有結(jié)晶析出，可以重新加熱后溶解，不影響使用。
2）Hanks•balanced salt solution（HBSS,不含Ca2+, Mg2+）（Cat No. 60161ES76）
操作方法
1）Fluo-3,AM儲存液的配制
利用高質(zhì)量無水DMSO溶解Fluo-3,AM配制成2-5mM的儲存液，該儲存液可分裝于-20℃避光干燥密封保存。每次使用前需回溫至室溫。
【注】：① 因為Fluo-3,AM在水中的溶解性和穩(wěn)定性較差，不可用水溶性緩沖液配制Fluo-3,AM儲存液。
② 溶解用的DMSO需要保證新鮮無水，否則將會導(dǎo)致AM 體水解，使熒光染料無法進(jìn)入細(xì)胞，影響實驗效果。
2）Fluo-3,AM工作液的配制：利用HBSS將Fluo-3,AM稀釋成1-5µM的工作液，具體稀釋方法如1 mM母液配制1 mL濃度為4 µM工作液，用1 mL HBSS溶液稀釋4 µL 1mM母液即可。
【注】：① 推薦該探針加載濃度在4-5µM，具體的使用濃度需根據(jù)實驗要求進(jìn)行優(yōu)化。為了避免過度加載造成細(xì)胞毒性，建議在取得有效結(jié)果的基礎(chǔ)上盡量使用zui低探針濃度。
② Fluo-3,AM工作液需現(xiàn)配現(xiàn)用，避免反復(fù)凍存。
3）（可選）如果Fluo-3進(jìn)入細(xì)胞的效果不好，可向 Fluo-3, AM/DMSO 溶液中加入適量20% Pluronic F-127溶液，zui終稀釋至其終濃度為0.02-0.05%，Pluronic F-127 可以防止 Fluo-3, AM 在 HBSS中聚合并能幫助其進(jìn)入細(xì)胞。
【注】：Pluronic F-127可降低Fluo-3,AM的穩(wěn)定性，因此只建議在配制工作液時加入，不建議將其加入儲存液長期保存。
4）取出預(yù)培養(yǎng)的細(xì)胞，除去培養(yǎng)基，使用 HBSS 溶液洗滌細(xì)胞 3次。
【注】：如果使用含血清的培養(yǎng)基，血清中的酯酶會分解 AM 基團，從而降低 Fluo 3-AM 進(jìn)入細(xì)胞的效果。另外含有酚紅的培養(yǎng)基會使本底值略微偏高，所以加工作液之前需盡量去除培養(yǎng)基殘留。
5）將Fluo-3, AM工作液加入細(xì)胞，加入量以覆蓋細(xì)胞為準(zhǔn)。在37℃培養(yǎng)15-60min，然后除去Fluo-3, AM工作液。
【注】：① 關(guān)于孵育的時間，如果*做實驗不能確定，建議先孵育30min，看熒光效果：如果細(xì)胞死亡較多，適當(dāng)縮短時間；如果熒光強度太弱，適當(dāng)延長時間。
② 降低加載溫度可能會減少探針AM酯運載技術(shù)造成的探針區(qū)室化。
6）用HBSS溶液洗滌細(xì)胞 3 次，以充分去除殘留的 Fluo 3-AM 工作液。然后加入 HBSS 溶液覆蓋細(xì)胞。
7）37℃培養(yǎng)箱孵育約20-30min，以確保 AM 基團在細(xì)胞內(nèi)的*去酯化作用。
【注】：（可選）對于含有陰離子通道蛋白的細(xì)胞，5-7步驟中可加入有機陰離子轉(zhuǎn)運抑制劑probenecid（1-2.5mM）或sulfinpyrazone(0.1-0.25mM)到細(xì)胞外液以減少指示劑去酯后的滲漏。
8）激光共聚焦顯微鏡或流式細(xì)胞儀等進(jìn)行檢測。激發(fā)波長506nm，發(fā)射波長526nm。
【注】：標(biāo)記的條件因細(xì)胞種類而異，每次實驗前，請先確定*條件。以上方法僅供參考。
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