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翌圣生物科技（上海）股份有限

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供應(yīng)簡介

吉滿生物的GM easyTM 慢病毒包裝試劑盒（GM easyTM Lentiviral Packaging Kit ，Cat.No. GMeasy-10,20/40）包括優(yōu)化的慢病毒包裝輔助質(zhì)?；旌衔铮℅M easyTM Lentiviral Mix）、表達(dá)eGFP蛋白的對(duì)照質(zhì)粒和高效轉(zhuǎn)染試劑（HG TransgeneTM Reagent），

詳細(xì)介紹

Cat.No. GMeasy-10（10個(gè)10cm皿）

Cat.No. GMeasy-20（20個(gè)10cm皿）

Cat.No. GMeasy-40（40個(gè)10cm皿）

產(chǎn)品簡介

吉滿生物的GM easy^TM 慢病毒包裝試劑盒（GM easy^TM Lentiviral Packaging Kit，Cat.No. GMeasy-10,20/40）包括優(yōu)化的慢病毒包裝輔助質(zhì)粒混合物（GM easy^TM Lentiviral Mix）、表達(dá)eGFP蛋白的對(duì)照質(zhì)粒和高效轉(zhuǎn)染試劑（HG Transgene^TM Reagent），吉滿的慢病毒包裝試劑盒，可以兼容第二代和第三代的慢病毒包裝質(zhì)粒，其優(yōu)勢(shì)在于慢病毒包裝時(shí)間周期短（一周之內(nèi)即可拿到純化好的高滴度慢病毒）、病毒，可應(yīng)用于針對(duì)不同基因和藥物靶標(biāo)的臨床前細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)和整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。非常適合于病毒包裝初試者。

產(chǎn)品組分及保存

品名	Cat.No.	內(nèi)容	保存
GM easy^TM Lentiviral Mix	GMLCP-10 GMLCP-20 GMLCP-40	100 μl（1μg/μl） 200 μl（1μg/μl） 400 μl（1μg/μl）	-20℃
HG Transgene^TM Reagent	HGTG-06 HGTG-12	0.6 ml 1.2 ml 1.2 ml*2	4℃
eGFP對(duì)照質(zhì)粒（Amp⁺）	GMLNC-01	1.5 μg	-20℃

慢病毒包裝所需其他材料（選用）

1. DMEM：GIBCO

2. FBS：GIBCO

3. Penicillin-Streptomycin：GIBCO

4. HEK 293T/293FT：慢病毒包裝及滴度檢測(cè)所用工具細(xì)胞（HEK 293T cat.No.CEH001）

5. Antibiotics：用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株篩選，如Puromycin，Neomycin （G-418）等

6. Competent cells：GMco（cat:CCE01）

病毒包裝前的準(zhǔn)備

慢病毒表達(dá)載體：包含病毒包裝，侵染和將病毒重組基因整合到基因組DNA中以便表達(dá)目的基因或者shRNA的基本元件。吉滿生物提供的慢病毒載體pGMLV系列經(jīng)過精心優(yōu)化，能夠包裝出超高滴度的慢病毒。吉滿生物提供慢病毒載體構(gòu)建服務(wù)，詳情請(qǐng)見公司www.genomeditech。。ｃｏｍ。另外載體擴(kuò)增盡量選擇吉滿提供的感受態(tài)（cat:CCE01），避免質(zhì)粒重組。

DNA溶液的制備：以QIAGEN公司的質(zhì)粒抽提試劑盒提取慢病毒包裝系統(tǒng)中各種質(zhì)粒DNA，質(zhì)粒DNA溶于除菌的TE或ddH₂O中，以紫外光吸收法測(cè)定其濃度及純度，保證所提質(zhì)粒DNA 的 A260/A280在1.8～2.0之間。

細(xì)胞狀態(tài)：良好的細(xì)胞狀態(tài)對(duì)病毒的包裝至關(guān)重要，避免細(xì)胞培養(yǎng)基有細(xì)菌、真菌或支原體的污染，盡量使用傳代次數(shù)較少的細(xì)胞，如果細(xì)胞是剛復(fù)蘇的話，傳兩代之后再包裝。吉滿提供低代數(shù)病毒包裝細(xì)胞株293T（cat.No.CEH001）。

慢病毒包裝

吉滿生物慢病毒載體表達(dá)系統(tǒng)由pGMLV慢病毒載體和GM easy^TM Lentiviral Mix質(zhì)粒組成。pGMLV慢載體中含有HIV的基本元件 5’LTR和 3’LTR以及其他輔助元件，例如WPRE和cPPT/CTS等。吉滿可以根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康尼槍?duì)pGMLV載體改造以進(jìn)行啟動(dòng)子活性研究、基因表達(dá)研究、RNA干擾等研究。GM easy^TM Lentiviral Mix能夠表達(dá)病毒包裝需要的各種必需成分如：gag基因，編碼病毒主要的結(jié)構(gòu)蛋白； pol基因，編碼病毒特異性的酶；rev基因，編碼調(diào)節(jié) gag和 pol基因表達(dá)的調(diào)節(jié)因子；還含有單純皰疹病毒來源的 VSV-G基因，提供病毒包裝所需要的包膜蛋白，可以兼容第二代和第三代的慢病毒包裝質(zhì)粒。

實(shí)驗(yàn)流程

制備編碼慢病毒顆粒的重組病毒質(zhì)粒及其輔助包裝原件載體質(zhì)粒，重組質(zhì)粒載體和輔助質(zhì)粒載體分別進(jìn)行高純度無內(nèi)毒素抽提，使用HG Transgene^TM Reagent進(jìn)行共轉(zhuǎn)染 293T細(xì)胞，轉(zhuǎn)染后8h 更換為*培養(yǎng)基，培養(yǎng)48h后，收集富含慢病毒顆粒的細(xì)胞上清液，對(duì)其濃縮后得到高滴度的慢病毒濃縮液，在293T細(xì)胞中測(cè)定病毒滴度。在一定滴度范圍內(nèi)的慢病毒顆?？梢詽M足大部分體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)需求。

293T細(xì)胞分盤

轉(zhuǎn)染前一天，將已經(jīng)長好的細(xì)胞以合適比例傳代到10cm培養(yǎng)皿中，當(dāng)細(xì)胞長到~80%時(shí)準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染。

轉(zhuǎn)染前換液

轉(zhuǎn)染前1~2 h 將需要轉(zhuǎn)染的細(xì)胞換新鮮的培養(yǎng)基，12ml/10cm皿。注意：293T細(xì)胞貼壁性不是很好，換液時(shí)應(yīng)小心滴加盡量避免沖起細(xì)胞。

轉(zhuǎn)染

取無菌的1.5ml EP管或15ml離心管，按下列組分配制反應(yīng)體系：

無血清DMEM	1ml
DNA	10μg
GM easy^TM Lentiviral Mix	10μl（10μg）
HG Transgene^TM Reagent	60μl

混勻后，室溫放置18min~20min后，均勻滴加到提前換過液的培養(yǎng)皿中，后置于CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

換液

轉(zhuǎn)染18~20h后，小心吸掉細(xì)胞培養(yǎng)液棄于盛有消毒液的廢液杯中（注意：此時(shí)培養(yǎng)基中已含有少量的病毒，必須經(jīng)處理后才能丟棄，所用的移液槍頭等必須經(jīng)消毒液浸泡處理后才能丟棄），然后加15ml新鮮的培養(yǎng)基（也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求換為無血清的DMEM）繼續(xù)培養(yǎng)。

病毒收集

換液48h后，吸取細(xì)胞上清液于50ml離心管，4℃，500g離心5min，上清液用0.45μm濾器過濾后轉(zhuǎn)移到新的離心管中。此時(shí)上清液中的病毒顆?？梢灾苯尤z測(cè)滴度或者感染目的細(xì)胞，如果對(duì)病毒的滴度及純度有較高要求，可對(duì)上清液進(jìn)行濃縮與純化。

病毒分裝與保存

將病毒以40~50μl分裝，后保存于-80℃。

其他

詳細(xì)慢病毒包裝流程、注意事項(xiàng)及感染信息可以參見吉滿：www.genomeditech。。ｃｏｍ

吉滿對(duì)GM easy^TM慢病毒包裝試劑盒用戶提供*咨詢服務(wù)。

產(chǎn)品價(jià)格：

貨號(hào)	名稱	產(chǎn)地	規(guī)格	報(bào)價(jià)/元	*/元
GMLCP-10	Lentiviral Packaging Kit 慢病毒包裝試劑盒	Genomeditech	10個(gè)10cm皿	2798	1958
GMLCP-20	Lentiviral Packaging Kit 慢病毒包裝試劑盒	Genomeditech	20個(gè)10cm皿	4598	3218
GMLCP-40	Lentiviral Packaging Kit 慢病毒包裝試劑盒	Genomeditech	40個(gè)10cm皿	7698	5388

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