原因	建議
一抗與二抗不匹配	選擇針對(duì)一抗來(lái)源種屬制備的二抗；
一抗不識(shí)別目的的種屬的蛋白	1)檢查抗體的說(shuō)明書，適用范圍內(nèi)是否包含目的種屬 2)使用陽(yáng)性對(duì)照來(lái)檢查抗體質(zhì)量
一抗或二抗不足，沒(méi)有足夠的抗體結(jié)合到目的蛋白	1)降低抗體稀釋倍數(shù)，增加抗體濃度 2)延長(zhǎng)孵育時(shí)間
封閉劑與一抗有交叉反應(yīng)	改變封閉劑
抗原不足	1)每個(gè)泳道加入20-30ug總蛋白 2)制備樣品要使用蛋白酶抑制物及使用陽(yáng)性對(duì)照
在檢測(cè)的組織內(nèi)目的蛋白表達(dá)水平低	檢測(cè)樣本不表達(dá)目的蛋白選擇表達(dá)量高的細(xì)胞作為陽(yáng)性對(duì)照，用于確定檢測(cè)樣本是否為陰性，也可更換細(xì)胞系
蛋白轉(zhuǎn)膜效率低	1)利用麗春紅檢測(cè)轉(zhuǎn)膜效率;檢查轉(zhuǎn)移裝置是否電極弄反 2)轉(zhuǎn)移前膜是否用甲醇侵泡過(guò)
膜過(guò)渡洗滌	減少洗滌時(shí)間和強(qiáng)度
疊氮鈉抑制二抗活性	二抗稀釋液內(nèi)不用疊氮鈉

Western blot實(shí)驗(yàn)異常分析一覽表

『沒(méi)有特異條帶』

原因	建議
細(xì)胞系傳代過(guò)多后蛋白表達(dá)譜發(fā)送變化	1)使用未傳代或傳代次數(shù)較少的細(xì)胞系進(jìn)行樣品制備
蛋白本身有很多修飾	1)查閱文獻(xiàn)，確定目的蛋白是否存在多種修飾
蛋白被消化或者降解	1)蛋白樣品確保未被污染，確保含有蛋白酶抑制劑
所檢測(cè)蛋白存在多種剪接體，導(dǎo)致分子量大小不同	1)查閱文獻(xiàn)或者通過(guò)搜索數(shù)據(jù)庫(kù)來(lái)確定該蛋白是否存在多種長(zhǎng)度不同的編碼mRNA
一抗或二抗?jié)舛雀?/td>	1)減低抗體濃度
洗滌不夠	1)充分洗滌

Western blot實(shí)驗(yàn)異常分析一覽表

『條帶大小不正確』

原因	建議
目的蛋白被降解	確保蛋白樣品未被污染，確保含有蛋白酶抑制劑
存在不同的剪接體	查閱文獻(xiàn)或者通過(guò)搜索數(shù)據(jù)庫(kù)來(lái)確定該蛋白是否存在多種長(zhǎng)度不同的編碼mRNA
重組蛋白	檢測(cè)是否存在額外加入的蛋白
特殊蛋白如MDM2等	仔細(xì)閱讀抗體說(shuō)明書

上海信帆生物提供Western blot實(shí)驗(yàn)代測(cè)服務(wù)，除此之外本公司有放射免疫技術(shù)服務(wù)、蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)、免疫組化、PCR技術(shù)服務(wù)、生物信息學(xué)數(shù)據(jù)分析等，如果您想了解Western blot的更多內(nèi)容或者其他服務(wù)信息，您可以本公司的了解更多產(chǎn)品的詳細(xì)信息，至善至美的服務(wù)是我們永無(wú)止境的追求，歡迎新老客戶放心選購(gòu)自己心儀產(chǎn)品，我們將竭誠(chéng)為您服務(wù)！

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