選對(duì)凝膠很重要

3種zui常見的凝膠包括Tris-Glycine, Bis-Tris and Tris-Acetate. Tris-Glycine凝膠的PH為8.6，且保質(zhì)期很短。在跑膠的過(guò)程中，PH還有上升的趨勢(shì)，可達(dá)到9.5。這會(huì)導(dǎo)致蛋白降解和低分辨率。

Bis-Tris凝膠的PH為6.4，相對(duì)Tris-Glycine凝膠，穩(wěn)定性和保質(zhì)期都有所增加。但這種凝膠需要在溶液中增加抗氧化劑，比如DTT，以維持蛋白的還原性。

Tris-Acetate 凝膠的PH為7，跑大分子蛋白會(huì)呈現(xiàn)很高的分辨率。 跑大分子蛋白時(shí)，我們推薦使用Tris-Acetate 凝膠。

凝膠濃度很重要

既然選擇了Tris-Acetate 凝膠，還有幾個(gè)要考慮的問(wèn)題。凝膠濃度與孔徑成反比：濃度越小，孔越大。較大的蛋白質(zhì)更容易通過(guò)較大的孔，所以我建議使用低百分比的凝膠，如7％?？梢允褂锰荻饶z或非梯度凝膠，梯度凝膠非常適合新樣本。

提高轉(zhuǎn)移buffer中的SDS，減少甲醇

轉(zhuǎn)移buffer的組成至關(guān)重要。如果有甲醇存在，大分子蛋白很容易沉淀。通過(guò)減少轉(zhuǎn)移buffer中的甲醇百分比（10％或更低）來(lái)避免這種情況發(fā)生。 為了進(jìn)一步確保蛋白質(zhì)不會(huì)沉淀，考慮添加SDS至終濃度為0.1％。SDS向蛋白添加均勻的負(fù)電荷，使得它們更容易從凝膠轉(zhuǎn)移到膜上。

選擇合適的膜

膜一般有PVDF膜或NC膜。跑大分子蛋白選擇PVDF膜。如前面所說(shuō)，如果有甲醇存在，大分子蛋白很容易沉淀。而PVDF膜不需要在轉(zhuǎn)移buffer中添加甲醇，目的蛋白轉(zhuǎn)印的機(jī)會(huì)更高。兩種類型的膜都有各種孔徑尺寸，zui常見的是0.2um和0.45um。與凝膠一樣，較大的蛋白比較小的更容易穿過(guò)大孔隙。大多數(shù)蛋白質(zhì)（> 20kDa）可以用0.45um膜轉(zhuǎn)移，避免使用0.2um孔徑。

增加轉(zhuǎn)印時(shí)間

在正確的選擇完凝膠、轉(zhuǎn)印膜及轉(zhuǎn)移buffer后，轉(zhuǎn)印正式開始。半干轉(zhuǎn)快且方便，但不適用于大分子蛋白。我建議濕轉(zhuǎn)，因?yàn)榇蠓肿拥鞍邹D(zhuǎn)移時(shí)間很慢，推薦350-400 mA轉(zhuǎn)移90min或 4°C，40 mA，轉(zhuǎn)印留夜。

上海信帆生物公司主要代理產(chǎn)品：
ELISA試劑盒：進(jìn)口ELISA試劑盒,國(guó)產(chǎn)ELISA試劑盒,人elisa試劑盒，大鼠ELISA試劑盒，小鼠ELISA試劑盒等。
培養(yǎng)基：微生物培養(yǎng)基,顯色培養(yǎng)基,BD培養(yǎng)基,gibco培養(yǎng)基等。
血清：胎牛血清,科研血清,動(dòng)物血清，NQBB,Hyclone，Gbico原裝血清 。
生物試劑：Amresco,Sigma,ABM,BIO-RAD,BD,ABCAM等進(jìn)口試劑。
標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照品：進(jìn)口對(duì)照品,進(jìn)口對(duì)照藥材,進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)品.
抗體：一抗,二抗，流式抗體等。
放免試劑盒：進(jìn)口放免試劑盒，國(guó)產(chǎn)放免試劑盒，進(jìn)口美國(guó)鳳凰等放免試劑盒。
實(shí)驗(yàn)室代測(cè)服務(wù)：放免代測(cè)，WB實(shí)驗(yàn)，免疫組化代測(cè)，熒光定量PCR代測(cè)，病理細(xì)胞染色代測(cè)，生化實(shí)驗(yàn)代測(cè)等。