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當(dāng)前位置:上海信帆生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>ELISA 樣本處理的注意事項
每個標(biāo)本量收集體積= 50ul × 檢測種類,如要做復(fù)孔,標(biāo)本量收集體積= 50ul × 檢測 種類×2 。
對于作某一個具體指標(biāo)來說,先用一系列稀釋度作一批標(biāo)本測定,得出對實驗有意義 的一個稀釋度(即測定劑量反應(yīng)曲線),然后用一個zui適稀釋度測定即可。
收集標(biāo)本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當(dāng)天進行檢測的標(biāo)本,儲存在
4 ℃ 備用,如有特殊原因需要周期收集標(biāo)本,將標(biāo)本及時分裝后放在 -20 ℃ 或 -70 ℃ 條
件下保存。避免反復(fù)凍融。標(biāo)本 2 -8 ℃ 可保存 48 小時, -20 ℃ 可保存 1 個月。 -70 度
可保存 6 個月。部分激素類標(biāo)本需添加抑肽酶。
血清標(biāo)本采集時,應(yīng)注意避免溶血,紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì), 以 HRP 為標(biāo)記的 ELISA 測定中,溶血標(biāo)本可能會增加非特異性顯色。
為了保證尿液檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性,必須正確收集尿液標(biāo)本和保存。盛尿容器要清潔干燥。
使用一次性的容器(如塑料尿杯),避免因用藥并清洗不干凈而造成的污染,影響檢 測結(jié)果。尿液標(biāo)本必須新鮮,留取后,應(yīng)及時檢測或保存,以免細菌繁殖。因在室溫中久 置后(尤其是夏季)尿中磷酸鹽等可析出結(jié)晶而干擾檢測。
標(biāo)本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。 保存過久可發(fā)生聚合在 ELISA 中可使本底加深。
凍結(jié)標(biāo)本融解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下顛 倒混和,不要在混勻器上強烈振蕩。
混濁或有沉淀的標(biāo)本應(yīng)先離心或過濾,澄清后再檢測。
反復(fù)凍融會使蛋白效價降低,所以待測標(biāo)本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存。也可 加入適當(dāng)防腐劑。
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