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目的 ：

建立微生物鑒定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，使其規(guī)范化、合理化

范圍：

環(huán)境監(jiān)測(cè)、生產(chǎn)設(shè)備、藥品進(jìn)廠原料及成品微生物檢測(cè)和水質(zhì)檢測(cè)過程中分離得到的微生物及工作菌株。

職責(zé)：

1、 質(zhì)量控制部檢驗(yàn)人員對(duì)具體操作負(fù)責(zé)；

2 、質(zhì)量保證部負(fù)責(zé)監(jiān)督本規(guī)程的執(zhí)行。 

內(nèi)容 ：

1、概述 
微生物是對(duì)藥品原料、生產(chǎn)環(huán)境和成品造成污染的重要因素，也是造成生產(chǎn)失敗、成品不合格、直接或間接對(duì)人類造成危害的重要因素。因此，對(duì)從藥品原料、生產(chǎn)環(huán)境、檢測(cè)環(huán)境、設(shè)備和成品微生物檢測(cè)過程中分離得到的污染微生物進(jìn)行鑒定，是十分必要的，也可為檢驗(yàn)和生產(chǎn)提供有效的依據(jù)。微生物鑒定應(yīng)遵循逐步縮小的原則，用細(xì)菌分類學(xué)的知識(shí)和操作步驟，逐步將未知微生物落實(shí)到科、屬、種。 

2 、菌株采集 
從藥品原料、成品檢驗(yàn)、環(huán)境監(jiān)測(cè)和水質(zhì)檢測(cè)過程中，采集菌株。 

3 、菌株純化 
無(wú)菌操作用接種環(huán)挑取待鑒定菌落或少許含菌液到相應(yīng)的培養(yǎng)基上劃線分離，純化培養(yǎng)。

4 、鑒定程序

培養(yǎng)特征 ：菌落形態(tài)，如形狀、大小、色澤、隆起、表面狀況、質(zhì)地、光澤、水溶性色素等。

細(xì)胞形態(tài)：在顯微鏡下，仔細(xì)觀察細(xì)胞形態(tài) 

形狀：如球狀、桿狀、螺旋狀、弧狀、絲狀及特殊形狀。

大小：重要的是細(xì)胞的寬度或直徑。 

排列：?jiǎn)蝹€(gè)、成對(duì)、成鏈或其他特殊的排列方式。

特殊的細(xì)胞結(jié)構(gòu) 
鞭毛：有無(wú)鞭毛、著生位置及其數(shù)量。 

芽孢：有無(wú)芽孢、形狀、著生位置、孢囊是否膨大。

孢子：孢子形狀、著生位置、數(shù)量及排列。

運(yùn)動(dòng)性：鞭毛泳動(dòng)、滑動(dòng)、螺旋體運(yùn)動(dòng)方式。 

革蘭氏染色反應(yīng)：呈陽(yáng)性或陰性

革蘭氏染色試驗(yàn) 

原理：革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌的細(xì)胞壁較厚，細(xì)胞壁中的肽聚糖含量高且網(wǎng)格結(jié)構(gòu)緊密，含脂量又低，當(dāng)用結(jié)晶紫復(fù)合溶液染色細(xì)胞后用脫色劑脫色時(shí)，引起了細(xì)胞壁肽聚糖層風(fēng)狀結(jié)構(gòu)的孔徑縮小以至關(guān)閉，阻止了結(jié)晶紫－碘復(fù)合物的逸出，故菌體呈現(xiàn)深紫色；革蘭氏陰性細(xì)菌呈現(xiàn)復(fù)染液的紅色。 

操作：在潔凈的載玻片上滴一滴蒸餾水或生理鹽水，用接種環(huán)挑取少量菌齡為培養(yǎng)18～24小時(shí)的菌苔，涂片經(jīng)火焰固定，加結(jié)晶紫染液染1分鐘，水洗干凈；滴加革蘭氏碘液復(fù)染1分鐘，水洗，瀝干；滴加95%乙醇脫色，約20～30秒，不時(shí)搖動(dòng)玻片至無(wú)紫色為止，水洗；滴加番紅染液復(fù)染1～2分鐘，水洗，待干。油鏡檢查。 

陽(yáng)性－陰性對(duì)照控制：取金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌懸液，制成涂片，分別染色操作后作為革蘭氏陽(yáng)性和陰性的對(duì)照控制。 
結(jié)果判斷：菌體呈藍(lán)紫色為革蘭氏陽(yáng)性菌；菌體呈紅色為革蘭氏陰性菌。

在以下情況必須進(jìn)行微生物鑒定

新購(gòu)進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)菌株經(jīng)傳代菌株。

產(chǎn)品檢驗(yàn)結(jié)果超標(biāo)或出現(xiàn)異常。 

控制菌檢查出現(xiàn)異常時(shí)，如有菌生長(zhǎng)，不管是否典型菌生長(zhǎng)，均需鑒定。

水質(zhì)檢驗(yàn)時(shí)，微生物檢測(cè)結(jié)果超過行動(dòng)限。

環(huán)境監(jiān)測(cè)時(shí)，微生物檢測(cè)結(jié)果超過行動(dòng)限。