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行業(yè)產(chǎn)品
大家在養(yǎng)細胞的時候,想必大家也一定遇到過細胞狀態(tài)差這種情況,但是細胞狀態(tài)差,有很多種原因造成?
細胞狀態(tài)很差,常常出現(xiàn)的現(xiàn)象是:細胞邊緣不清晰、細胞不飽滿、折光性差、背景比較臟、黑點很多、細胞碎片多(細胞凋亡后的細胞碎片)、單個細胞內(nèi)有空泡(凋亡)且空泡比較多;如果細胞出現(xiàn)老化,也就是細胞比較扁平、增殖減緩、細胞核體積增大、細胞突觸變多,此時觀察到的細胞狀態(tài)也是不正常的。所以,除了考慮血清和細菌污染的問題,細胞老化也不容忽視~
首先,我們要知道什么是細胞老化?
長期的細胞周期阻滯是老化細胞的基本特征,也是體外鑒定細胞老化*的指標。為了檢查細胞是否躍出了細胞周期,人們通常檢測增殖指示分子Ki-67的表達豐度;或者通過將與胸腺嘧啶相似的溴脫氧尿嘧啶(Bromodeoxyuridine,BrdU)摻入到細胞培養(yǎng)基中,觀察是否有新的DNA合成。細胞老化主要表現(xiàn)為G1期阻滯,個別情況下也可伴隨G2/M期周期阻滯,或直接由G2/M期阻滯誘發(fā)形成。
無論是原代細胞或是細胞株,在細胞培養(yǎng)過程中細胞老化現(xiàn)象是存在且常見的,但卻容易被操作人員忽略,老化的細胞會出現(xiàn)的特征包括:細胞增殖變慢、細胞核體積異常及多核(4-8核)、表面分泌物增多、細胞體積增大、細胞扁平、細胞質(zhì)中出現(xiàn)空泡等現(xiàn)象。
研究表明,衰老細胞的細胞核、細胞質(zhì)和細胞膜等均有明顯的變化:
①細胞內(nèi)水分減少,體積變小,新陳代謝速度減慢;
②細胞內(nèi)酶的活性降低;
③細胞內(nèi)的色素會積累;
④細胞內(nèi)呼吸速度減慢,細胞核體積增大,核膜內(nèi)折,染色質(zhì)收縮,顏色加深.線粒體數(shù)量減少,體積增大;
⑤細胞膜通透性功能改變,使物質(zhì)運輸功能降低.
形態(tài)變化
總體來說老化細胞的各種結(jié)構(gòu)呈退行性變化.衰老細胞的形態(tài)變化表現(xiàn)有:
1、核:增大、染色深、核內(nèi)有包含物
2、染色質(zhì):凝聚、固縮、碎裂、溶解
3、質(zhì)膜:粘度增加、流動性降低
4、細胞質(zhì):色素積聚、空泡形成
5、線粒體:數(shù)目減少、體積增大
6、高爾基體:碎裂
7、尼氏體:消失
8、包含物:糖原減少、脂肪積聚
9、核膜:內(nèi)陷
分子水平的變化
1、DNA:從總體上DNA復(fù)制與轉(zhuǎn)錄在細胞衰老時均受抑制,但也有個別基因會異常激活,端粒DNA丟失,線粒體DNA特異性缺失,DNA氧化、斷裂、缺失和交聯(lián),甲基化程度降低.
2、 RNA:mRNA和tRNA含量降低.
3、蛋白質(zhì):含成下降,細胞內(nèi)蛋白質(zhì)發(fā)生糖基化、氨甲?;?、脫氨基等修飾反應(yīng),導(dǎo)致蛋白質(zhì)穩(wěn)定性、抗原性,可消化性下降,自由基使蛋白質(zhì)肽斷裂,交聯(lián)而變性.氨基酸由左旋變?yōu)橛倚?
4、 酶分子:活性中心被氧化,金屬離子Ca2+、Zn2+、Mg2+、Fe2+等丟失,酶分子的二級結(jié)構(gòu),溶解度,等電點發(fā)生改變,總的效應(yīng)是酶失活.
5、脂類:不飽和脂肪酸被氧化,引起膜脂之間或與脂蛋白之間交聯(lián),膜的流動性降低.如下圖:
圖1 HEK293細胞
圖2 MSC細胞
由上圖可知細胞老化,出現(xiàn)細胞體積增大、細胞扁平。
1. 不要等細胞長得太滿才傳代。細胞太密會導(dǎo)致細胞狀態(tài)下降,產(chǎn)生細胞接觸性抑制。
2. 細胞不要消化過度。采用胰蛋白酶消化細胞,會造成細胞表面一定程度的細胞損傷。
3. 最重要的是使用優(yōu)質(zhì)的血清和培養(yǎng)基:干細胞對培養(yǎng)基中的內(nèi)毒素非常敏感。除了要留意基礎(chǔ)培養(yǎng)基的內(nèi)毒素外,也要留意血清的內(nèi)毒素。如果血清中內(nèi)毒素≥3EU/ml時,干細胞很容易老化或死亡,導(dǎo)致細胞“亞健康"狀態(tài),導(dǎo)致實驗受到影響。很多使用者,在血清在試用前,就會通過提早審核該批次《檢測報告》,以決定是否入圍進行試用。
4. 在開始養(yǎng)細胞并傳代時,也要特別注意凍存細胞,以保持細胞有種子庫存在,可以有效避免細胞損傷。
因此應(yīng)挑選內(nèi)毒素低的優(yōu)質(zhì)血清,如進口胎牛血清品牌:Ausgenex。
一、血清信息
中文:Ausgenex胎牛血清 FBS500-S
品牌:Ausgenex
規(guī)格:500ml/瓶
貨號:FBS500-S
批號:見瓶身
儲存溫度:-10℃ to -40℃
二、產(chǎn)品描述
本胎牛血清(Fetal Bovine Serum, FBS)是AusgeneX產(chǎn)品(原產(chǎn)品編號為FBS500-S),產(chǎn)地澳洲。本胎牛血清不僅適用于常規(guī)的細胞培養(yǎng),更適合用于一些要求較高的細胞的培養(yǎng)。
三、Ausgenex胎牛血清的優(yōu)勢是:
過嚴格的質(zhì)量控制和理、化、微生物指標的分析檢測,pH值、滲透壓、血紅蛋白濃度、內(nèi)毒素水平、總蛋白等多項指標檢測合格,無細菌、真菌、支原體及病毒污染,具有高質(zhì)量和高穩(wěn)定性。
本胎牛血清來源于澳洲,來源清晰,具有可追溯性。
本胎牛血清,不含任何人為的添加成分,可應(yīng)用于各種常規(guī)的細胞培養(yǎng),特別適合于一些要求較高的細胞的培養(yǎng),為細胞提供必須的營養(yǎng)物質(zhì)和多種生長因子,有效促進細胞生長。
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