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小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)ELISA試劑盒實驗-結(jié)果判定:定量測定
ELISA操作步驟復(fù)雜,影響反應(yīng)因素較多,特別是固相載體的包被難達(dá)到各個體之間的一致,因此在定量測定中,每批測試均須用一系列不同濃度的參考標(biāo)準(zhǔn)品在相同的條件下制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。測定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA,標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍一般較寬,曲線zui高點的吸光度可接近2.0,繪制時常用半對數(shù)紙,以檢測物的濃度為橫坐標(biāo),以吸光度為縱坐標(biāo),將各濃度的值逐點連接,所得曲線一般呈S形,其頭、尾部曲線趨于平坦,中央較呈直線的部分是的檢測區(qū)域。甲胎蛋白質(zhì)ELISA測定的標(biāo)準(zhǔn)曲線示。測定小分子量物質(zhì)常用競爭法,其標(biāo)準(zhǔn)曲線中吸光度與受檢物質(zhì)的濃度呈負(fù)相關(guān)。標(biāo)準(zhǔn)曲線的形狀因試劑盒所用模式的差別而略有不同。ELISA測定的標(biāo)準(zhǔn)曲線示。
小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)ELISA試劑盒實驗之顯色
顯色是ELISA中的zui后一步溫育反應(yīng),此時酶催化無色的底物生成有色的產(chǎn)物。反應(yīng)的溫度和時間仍是影響顯色的因素。在一定時間內(nèi),陰性孔可保持無色,而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強。適當(dāng)提高溫度有助于加速顯色進行。在定量測定中,加入底物后的反應(yīng)溫度和時間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確。定性測定的顯色可在室溫進行,時間一般不需要嚴(yán)格控制,有時可根據(jù)陽性對照孔和陰性對照孔的顯色情況適當(dāng)縮短或延長反應(yīng)時間,及時判斷。
OPD底物顯色一般在室外溫或37℃反應(yīng)20-30分鐘后即不再加深,再延長反應(yīng)時間,可使本底值增高。OPD底物液受光照會自行變色,顯色反應(yīng)應(yīng)避光進行,顯色反應(yīng)結(jié)束時加入終止液終止反應(yīng)。OPD產(chǎn)物用硫酸終止后,顯色由橙黃色轉(zhuǎn)向棕黃色。
TMB受光照的影響不大,可在室溫中置于操作臺上,邊反應(yīng)觀察結(jié)果。但為保證實驗結(jié)果的穩(wěn)定性,宜在規(guī)定的適當(dāng)時間閱讀結(jié)果。TMB經(jīng)HRP作用后,約40分鐘顯色達(dá),隨即逐漸減弱,至2小時后即可*消退至無色。TMB的終止液有多種,疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉(SDS)等酶抑制劑均可使反應(yīng)終止。這類終止劑尚能使藍(lán)色維持較長時間(12-24小時)不褪,是目視判斷的良好終止劑。此外,各類酸性終止液則會使藍(lán)色轉(zhuǎn)變成黃色,此時可用特定的波長(450nm)測讀吸光值。
小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)ELISA試劑盒實驗之比色
比色前應(yīng)先用潔凈的吸水紙拭干板底附著的液體,然后將板正確放入酶標(biāo)比色儀的比色架中。以軟板為載體的試驗,需先將板置于標(biāo)準(zhǔn)96孔的座架中,才可進行比色。在加底物液顯色前,先將軟板邊緣剪凈,這樣,此板就可*平妥坐入座架中。比色時應(yīng)先以蒸餾水校零點,測讀底物孔(未經(jīng)任何反應(yīng)僅加底物液的孔)和空白孔(以生理鹽水或稀釋液代替標(biāo)本作全過程的孔),以記錄本次試驗的試劑狀況。其后可用空白孔以蒸餾水校零點,以上各孔的吸光度需減去空白孔的吸光度,然后進行計算。
比色結(jié)果的表達(dá)以往通用光密度(oplical density,OD),現(xiàn)按規(guī)定用吸光度(absorbence,A),兩者含義相同。通常的表示方法是,將吸收波長寫于A字母的右下角,如OPD的吸收波長為492nm,表示方法為"A492nm"或"OD492nm"。
小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)ELISA試劑盒相關(guān)產(chǎn)品如下:xyA866Ra 大鼠甲狀旁腺激素(PTH)ELISA試劑盒
xyA010Ra 大鼠結(jié)締組織生長因子(CTGF)ELISA試劑盒
xyA524Ra 大鼠組織因子(TF)ELISA試劑盒
xyA525Ra 大鼠組織型纖溶酶原激活因子(tPA)ELISA試劑盒
xyA176Ra 大鼠Ⅲ型膠原(COL3)ELISA試劑盒
xyA257Ra 大鼠Ⅱ型前膠原氨基端原肽(PⅡNT)ELISA試劑盒
xyA528Ra 大鼠血小板衍生生長因子A(PDGFA)ELISA試劑盒
xyA530Ra 大鼠纖維蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)ELISA試劑盒
xyA531Ra 大鼠纖溶酶原激活物抑制因子2(PAI2)ELISA試劑盒
xyA532Ra 大鼠纖溶酶原激活物抑制因子1(PAI1)ELISA試劑盒
xyA537Ra 大鼠神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NHZ)ELISA試劑盒
xyA541Ra 大鼠腦鈉素(BNP)ELISA試劑盒
xyA544Ra 大鼠免疫球蛋白G(IgG)ELISA試劑盒
xyA545Ra 大鼠免疫球蛋白E(IgE)ELISA試劑盒
xyA546Ra 大鼠免疫球蛋白A(IgA)ELISA試劑盒
xyA547Ra 大鼠血管細(xì)胞粘附分子1(VCAM1)ELISA試劑盒
xyA551Ra 大鼠堿性成纖維細(xì)胞生長因子(FGF2)ELISA試劑盒
xyA552Ra 大鼠組織金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP1)ELISA試劑盒
xyA553Ra 大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP9)ELISA試劑盒
xyA554Ra 大鼠尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶1()ELISA試劑盒
xyA559Ra 大鼠腸型脂肪酸結(jié)合蛋白(FABP2)ELISA試劑盒
xyA560Ra 大鼠表皮生長因子(EGF)ELISA試劑盒
xyA843Ra 大鼠促性腺激素釋放激素(GnRH)ELISA試劑盒
xyA835Ra 大鼠促腎上皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)ELISA試劑盒
xyA839Ra 大鼠促甲狀腺素釋放激素(TRH)ELISA試劑盒
xyA480Ra 大鼠肌紅蛋白(MYO)ELISA試劑盒
xyA563Ra 大鼠白介素1β(IL1β)ELISA試劑盒
xyA567Ra 大鼠S100鈣結(jié)合蛋白B(S100B)ELISA試劑盒
xyA568Ra 大鼠S100鈣結(jié)合蛋白A11(S100A11)ELISA試劑盒
xyA571Ra 大鼠Ⅰ型膠原(COL1)ELISA試劑盒
xyA572Ra 大鼠Ⅱ型膠原(COL2)ELISA試劑盒
xyA573Ra 大鼠Ⅲ型前膠原氨基端原肽(PⅢNP)ELISA試劑盒
xyA603Ra 大鼠載脂蛋白B100(APOB100)ELISA試劑盒
xyA604Ra 大鼠載脂蛋白A2(APOA2)ELISA試劑盒
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