人小梁網(wǎng)細(xì)胞

細(xì)胞描述：小梁網(wǎng)細(xì)胞（TMC）在房水流動(dòng)機(jī)制中發(fā)揮重要作用。在 TMC 中已發(fā)現(xiàn)特定的神經(jīng)遞質(zhì)和神經(jīng)肽受體，其中包括***，乙酰膽堿和神經(jīng)肽 Y 。此外，在 TM 細(xì)胞中，一長串的血管活性多肽和生長因子能夠觸發(fā)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制[1] 。TMC 合成了不同類型的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白以及金屬蛋白酶。TMC 培養(yǎng)為TMC 藥理特性研究提供了有價(jià)值的工具[2]。小梁網(wǎng)細(xì)胞(HTMC)分離自人眼的近小管組織和角鞏膜區(qū)域，于原代并存。每瓶 1 毫升含有> 5 × 10 ^ 5 的 HTMC 細(xì)胞人小梁網(wǎng)細(xì)胞增殖能力取決于細(xì)胞取材、培養(yǎng)技術(shù)、培養(yǎng)條件等綜合因素。請(qǐng)按照正確的培養(yǎng)方法來解凍、

傳代，以此保證細(xì)胞具備良好的增殖能力，方便您的后繼研究順利進(jìn)行

質(zhì)量控制： 本細(xì)胞經(jīng)過了檢測(cè)，不含有細(xì)菌、真菌、病毒（HIV、HBV、HCV）、支原體。

培養(yǎng)條件：37℃，5% CO2，PH 值7.2~7.4，無菌恒溫培養(yǎng)。

用途： 本產(chǎn)品只提供給進(jìn)一步的科研使用，不可應(yīng)用于治療等其他方面。

細(xì)胞相關(guān)操作（注意：細(xì)胞操作都需嚴(yán)格按照無菌操作）收到復(fù)蘇好的貼壁細(xì)胞的處理方法：

• 先從外包裝盒拿出細(xì)胞瓶，在細(xì)胞瓶表面噴一層酒精，并小心去掉封口膜；
• 在顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)，并確定是否染菌，如有染菌，請(qǐng)立即拍照，并將細(xì)胞丟掉；
• 將培養(yǎng)瓶置于 37°C，5% CO₂ 的無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 4-6 小時(shí)；
• 倒掉多余的培養(yǎng)基，留正常體積的培養(yǎng)基；
• 重新將培養(yǎng)瓶置于 37°C，5% CO₂ 的無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜
• 第二天傳代。

收到凍存細(xì)胞的處理方法：

1.37°C 水浴預(yù)熱培養(yǎng)基；

2.從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37°C 水浴快速解凍（解凍后不要繼續(xù)暖細(xì)胞）；

3.在超凈臺(tái)中加入5ml 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，1000rpm 離心5min；

4.棄上清，加入5ml 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入 T25培養(yǎng)瓶中，輕輕晃勻；

5.置于37°C，5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話，瓶蓋不要擰太緊)；

6.第二天，用新鮮的培養(yǎng)基給細(xì)胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。

細(xì)胞傳代

1.當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到90%以上時(shí)，給細(xì)胞傳代；

2.37°C 水浴預(yù)熱培養(yǎng)基；

3.在超凈臺(tái)中，棄培養(yǎng)基，加入2-5mlPBS 清洗細(xì)胞后，再加入1ml 胰酶消化細(xì)胞；

4.顯微鏡下觀察到細(xì)胞變圓，有細(xì)胞開始脫離瓶壁時(shí)，加入5ml 培養(yǎng)基終止消化；

5.用移液器輕輕吹下瓶壁上剩余的細(xì)胞，并輕輕吹打?qū)⒓?xì)胞吹散；

6.將細(xì)胞移入離心管中，1000rpm 離心5min；

7.棄上清，加入15-20ml 的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入 T75培養(yǎng)瓶中或按適當(dāng)比例傳到 T25瓶中（確保細(xì)胞貼壁后融合度在25-50%之間），細(xì)胞密度在1×10⁴ cells/cm² (2.5×10⁵ cells/T-25瓶），混勻細(xì)胞懸液，確保均勻分布；

8.將培養(yǎng)瓶置于37°C，5% CO2的無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細(xì)胞凍存

 1.37°C 水浴預(yù)熱培養(yǎng)基；

2.消化細(xì)胞后給細(xì)胞計(jì)數(shù):

1)洗凈晾干血小板計(jì)數(shù)板和蓋玻片，將蓋玻片*覆蓋計(jì)數(shù)區(qū)；

2)充分混勻細(xì)胞，取少量(0.1-0.5ml)細(xì)胞懸液與等體積的染色液臺(tái)盼藍(lán)混合，移液器吹吸混合均勻，用移液器取20ul 混合液從蓋玻片兩端(與中間凹槽平行的兩端)分別打入細(xì)胞，以細(xì)胞懸液剛好浸濕蓋玻片為佳；

3)顯微鏡下，數(shù)四個(gè)計(jì)數(shù)區(qū)的總細(xì)胞數(shù)，無活性細(xì)胞染成藍(lán)色，活細(xì)胞不被染色；4)細(xì)胞密度=細(xì)胞總數(shù)/4×10000×2；這里10000是不變的，因?yàn)橛?jì)數(shù)的細(xì)胞是在體積為1mm×1mm×0.1mm 即10^-4cm³計(jì)數(shù)池內(nèi)，1cm³=1ml，將

四個(gè)計(jì)數(shù)區(qū)的細(xì)胞數(shù)除以4取平均數(shù)，乘2是補(bǔ)償加等體積臺(tái)盼藍(lán)形成的稀釋。5)細(xì)胞活性=活細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù)×100%。

注:細(xì)胞密度高時(shí)，可調(diào)整細(xì)胞懸液和臺(tái)盼藍(lán)的比例，計(jì)數(shù)時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)即可。

3.當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到傳代密度且細(xì)胞活性在90%以上時(shí)，可以凍存細(xì)胞。

4.在超凈臺(tái)中將要凍存的細(xì)胞移入離心管，1000rpm 離心5min。5.棄上清，用90%培養(yǎng)液+10%DMSO 的混合液重懸細(xì)胞，并調(diào)整細(xì)胞密度為1-3×10⁶/ml。6.將細(xì)胞懸液分裝到凍存管中(1-1.5ml/管)。

7.將裝有細(xì)胞的凍存管放入程序降溫凍存盒，-20°C 放1-2h 后，-80°C 過夜，然后快速轉(zhuǎn)移到液氮中。