小鼠活化素受體樣激酶1(ALK-1)檢測試劑盒

本試劑盒采用夾心法酶聯免疫吸附法，用于體外定量分析小鼠血清、血漿、組織勻漿、細胞培養(yǎng)上清、細胞裂解液中ALK-1的含量。預先包被的抗體為ALK-1單克隆抗體。檢測相抗體為ALK-1單克隆抗體，經生物素標記。樣品和生物素標記抗體先后加入酶標板孔反應后，PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標記的親和素反應；經過PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠ALK-1呈正相關。

檢測指標：ACVRL1；ALK-1；ALK1
檢測范圍：46.9pg/ml～3000pg/ml
特異性：系統(tǒng)和其它細胞因子無交叉反應
敏感性：＜2pg/ml

產品組成：

儲存條件：2-8℃（頻繁使用時），-20℃（長時間不用時）
有效期：6個月(4℃)；12個月（-20℃）

參考標準曲線數據：(取自某一批次質檢數據，僅供參考，用戶需要自己建立標準曲線)

小鼠活化素受體樣激酶1(ALK-1)檢測試劑盒原理:

問：請問標曲是每次都要做嗎？

答：是的，每次實驗，孵育時間，洗板次數等等條件均不一樣，不同實驗的標曲不能混用，做一次實驗需要做一次標準曲線，并且用當次，同一塊板上的標準曲線結果去計算板內樣品的濃度，才能得到準確的結果。

問：做預實驗時每種要做幾個復孔呀？

答：預實驗視情況而定，如果整個板子孔數較為充足，建議兩個復孔，如不充足，單孔也可以。要盡量保證實驗過程中加樣準確。

問：血清樣本少量溶血，顏色稍深，對結有影響嗎？

答：會有影響，建議取樣時需注意，避免溶血、脂血等樣本。如樣本條件受限，建議用樣本稀釋液適當稀釋，減少基質效應影響。

問：試劑盒有推薦稀釋濃度還需要自己測嗎？

答：試劑盒一般會給出不同樣品的推薦稀釋比例，但是為大致范圍，還是根據自己的樣本情況，設計預實驗測量計算。

問：加完終止液之后測的幾次數據差別也蠻大？

答：加完終止液后，顯色反應也不是永遠停止，形成的黃色顏色會隨著時間延長繼續(xù)加深，建議在15 min內讀數。

問：副孔差別比較大，是沒洗干凈嗎？

答：復孔值差異較大，主要原因應考慮加樣是否準確，洗板過程中是否有殘留以及是否有交叉污染。

問：配好的抗體沒用完如何保存，可保存多久？預實驗用了一個試劑盒里面的部分板子和試劑，剩下的板子和試劑還能繼續(xù)用于正式實驗嗎？

答：一般來講，配好的母液，可以在四度保存，多一個月左右。剩下的板子和試劑是可以繼續(xù)用于正式實驗的，間隔時間不要太長，一個月之內均可，需注意試劑避免污染，板子保持干燥。

問：后顯示的OD值在多少之間屬于可用值，有要求嗎？

答：有的，建議標準曲線高濃度點的OD值在2.0左右較好，也可參考說明書標曲的數據。

問：樣本總是在標準曲線之外，稀釋100倍也是，怎么辦？

答：在設置稀釋倍數之前，需要參考相關文獻，對于一些表達*的蛋白，確實會出現這種情況，建議繼續(xù)提高稀釋比例。

問：試劑盒推薦用450和540nm雙波長檢測，但條件有限可否換成450和620的雙波長？如何使用校準波長？還有，用空白孔校準可以么？

答：可以的，TMB底物顯色后，吸光峰值在450nm，另外的校準波長是防止氣泡等雜質造成的干擾設置，避開450左右50nm以上即可。兩次讀取的OD值，用OD450 - OD校準波長即可。盡量還是建議有條件的選用雙波長校準的方法，因為避免了不同孔的讀數影響，防止出現空白孔污染，導致讀數較高，無法校準的情況。

問：ELISA可以檢測胞內蛋白么？

答：可以的，選用支持組織勻漿的ELISA試劑盒即可，將組織樣品或細胞樣品進行裂解，提取胞內蛋白后進行蛋白定量，保證每孔上樣總蛋白量一致即可。

問：ELISA試劑盒顯色液是雙組份的，有些其他品牌的是單組分的，使用單組分的有影響么？

答：HRP酶標二抗的ELISA試劑盒，顯色底物一般為TMB，TMB不穩(wěn)定，曝光或污染氧化后會出現顯色反應，導致實驗背景升高，或無法使用，所以愛必信的ELISA試劑盒將顯色液調整為雙組份，方便穩(wěn)定保存，僅在使用前混合，避免了TMB的不穩(wěn)定影響實驗結果。如您選用的試劑盒為單組分顯色液，在使用前檢測是否為無色透明，如果是正常的，對結果也沒有影響，可以放心使用。

問：整個過程需要避光嗎？避光需要避到什么程度呢？

答：ELISA實驗中，在酶標抗體孵育，以及顯色底物孵育這兩步建議避光，其他步驟無需避光。避光可采用錫紙包裹，或將整個ELISA板子放入暗盒或抽屜等無光處即可。