人白介素28B(IL-28B)(IFN-λ3)檢測試劑盒

本試劑盒采用夾心法酶聯(lián)免疫吸附法，用于體外定量分析人血清、血漿、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-28B的含量。預(yù)先包被的抗體為IL-28B單克隆抗體。檢測相抗體為IL-28B單克隆抗體，經(jīng)生物素標(biāo)記。樣品和生物素標(biāo)記抗體先后加入酶標(biāo)板孔反應(yīng)后，PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標(biāo)記的親和素反應(yīng)；經(jīng)過PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。
。

檢測指標(biāo)：Interferon lambda-3；IFN-lambda-3；IFN-λ3；IFNλ3；Interleukin-28B；IL-28B；IL28B
檢測范圍：31.2pg/ml～2000pg/ml
特異性：系統(tǒng)和其它細(xì)胞因子無交叉反應(yīng)
敏感性：＜2pg/ml

產(chǎn)品組成：

儲存條件：2-8℃（頻繁使用時），-20℃（長時間不用時）。

人白介素28B(IL-28B)(IFN-λ3)檢測試劑盒原理:

問：同一樣品多次活性測試結(jié)果差異大怎么解決？

答：樣本保存不當(dāng)，會導(dǎo)致多次實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差較大，樣本應(yīng)盡量減少反復(fù)凍融，如需多次檢測，需在取樣后分裝保存。

問：請問標(biāo)曲是每次都要做嗎？

答：是的，每次實(shí)驗(yàn)，孵育時間，洗板次數(shù)等等條件均不一樣，不同實(shí)驗(yàn)的標(biāo)曲不能混用，做一次實(shí)驗(yàn)需要做一次標(biāo)準(zhǔn)曲線，并且用當(dāng)次，同一塊板上的標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果去計(jì)算板內(nèi)樣品的濃度，才能得到準(zhǔn)確的結(jié)果。

問：做預(yù)實(shí)驗(yàn)時每種要做幾個復(fù)孔呀？

答：預(yù)實(shí)驗(yàn)視情況而定，如果整個板子孔數(shù)較為充足，建議兩個復(fù)孔，如不充足，單孔也可以。要盡量保證實(shí)驗(yàn)過程中加樣準(zhǔn)確。比較嗎？

答：可以比較，不同稀釋比例，是因?yàn)椴煌瑯颖鹃g的表達(dá)差異較大，只要保證稀釋后的檢測樣品測量值準(zhǔn)確，還原回稀釋倍數(shù)后的濃度是可信的?？梢杂脕肀容^不同樣本的原始濃度差。

問：試劑盒里面有捕獲抗體么？

答：即用型ELISA試劑盒中，捕獲抗體已經(jīng)預(yù)包被至試劑盒中的ELISA板上，沒有單獨(dú)的捕獲抗體提供，直接使用ELISA板孵育稀釋后的樣本及標(biāo)準(zhǔn)品即可。

問：ELISA實(shí)驗(yàn)中，檢測計(jì)算抗原的濃度，臨界值怎么確定？

答：根據(jù)曲線測定的濃度，建議落在標(biāo)準(zhǔn)曲線的中間位置較好，極限不要超過標(biāo)準(zhǔn)曲線的上下限，如果超出較多，會影響計(jì)算結(jié)果準(zhǔn)確性，建議調(diào)整稀釋比例。

問：In vivo周期長的話，不太好做預(yù)實(shí)驗(yàn)，怎么辦？

答：In vivo造模取樣后，可將樣品分裝，取一部分樣品做ELISA預(yù)實(shí)驗(yàn)，剩余樣品再進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)；如多批次實(shí)驗(yàn)，操作較為一致，后續(xù)可取消預(yù)實(shí)驗(yàn)，根據(jù)前期結(jié)果進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)濃度設(shè)置。

問：做實(shí)驗(yàn)前怎么知道待測血清中炎癥因子的范圍呢？多大是高多小是低？

答：需要根據(jù)文獻(xiàn)推測，一般在健康人樣本中，炎癥因子表達(dá)很低，接近ELISA檢測下限，樣品無需稀釋或1:1稀釋即可，如已知為炎癥疾病或造模樣本，可參考文獻(xiàn)，在預(yù)實(shí)驗(yàn)中設(shè)置1:10-100（或更高）的稀釋比例，預(yù)實(shí)驗(yàn)檢測后確定佳濃度進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)。

問：ELISA實(shí)驗(yàn)中的洗板步驟如果沒有洗板機(jī)，需要如何操作？

答：實(shí)驗(yàn)室ELISA實(shí)驗(yàn)做的較多，還是建議使用洗板機(jī)洗板，效果更好，也更方便控制。如果沒有洗板機(jī)，在洗板過程中，需要注意洗板液添加后不要從孔中溢出，在加洗板液后，靜置1-2min，甩干液體后，在吸水紙上大力拍干；重復(fù)三次。

問：ELISA實(shí)驗(yàn)中，酶標(biāo)抗體識別的是哪個抗體？

答：在雙抗夾心法ELISA中，酶標(biāo)抗體識別的是檢測抗體，對檢測抗體進(jìn)行識別和酶標(biāo)記。

問：捕獲抗體如何包被在96孔板上？

答：如果選用的是即用型ELISA試劑盒，無需進(jìn)行抗體包被；如果是非即用型的ELISA試劑盒，首先，要選擇ELIS*別的板子，材質(zhì)應(yīng)為聚苯乙烯；然后用抗體包被液稀釋（pH9.6的碳酸鹽緩沖液或pH7.2的PBS或pH7-8的Tris-HCl）成工作濃度，然后每孔加100 μl稀釋后的捕獲抗體，室溫或4℃過夜包被，然后進(jìn)行洗板和封閉之后即可使用，如需長期保存，需要真空凍干后保存

問：ELISA實(shí)驗(yàn)中的捕獲抗體和檢測抗體是同一個抗體么？

答：不是的，在雙抗夾心法ELISA實(shí)驗(yàn)中，會同時用到捕獲抗體和檢測抗體，這兩個抗體是針對同一抗原蛋白的不同抗原位點(diǎn)的兩種抗體，這樣才可以同時結(jié)合抗原分子。

問： ELISA可以測DNA的表觀么？

答：不可以，ELISA是利用免疫學(xué)原理，定量檢測蛋白質(zhì)表達(dá)的技術(shù)。測DNA表觀遺傳學(xué)，主要是檢測DNA甲基化，可以選用ChIP技術(shù)。