BY4741 Chemically Competent Cell

產(chǎn)品規(guī)格

BY4741 Competent Cell:                                      100μl/支             保存： -80℃（3個(gè)月）

pYES2 (control vector, 10 ng/μl)                               10μl              保存：-80℃（12個(gè)月）

Carrier DNA (10 μg/μl)                                             100μl              保存：-20℃（12個(gè)月）

PEG/LiAC:                                                                    5ml              保存：    4℃（12個(gè)月）

基因型

MATa his3Δ1 leu2 met15Δ ura3-52

BY4741 Chemically Competent Cell產(chǎn)品說(shuō)明

BY4741菌株來(lái)源于釀酒酵母原始菌株——S288C，是實(shí)驗(yàn)室的常用菌株，為配子MATa型，廣泛應(yīng)用于鈉，鉀離子平衡；細(xì)胞抗鹽；各種金屬離子的吸收；重金屬毒性；各種糖類(lèi)，碳源對(duì)真核生物細(xì)胞生長(zhǎng)的影響；過(guò)氧化物，超氧化物的吸收與運(yùn)輸?shù)难芯恐?。BY4741釀酒酵母為組氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸 、尿嘧啶缺陷型菌株，可直接通過(guò)PEG/LiAc將pYES2質(zhì)粒轉(zhuǎn)化進(jìn)入BY4741細(xì)胞內(nèi)。質(zhì)粒pYES2的篩選標(biāo)志為URA，可用SD-URA板板進(jìn)行篩選。生產(chǎn)的BY4741感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，-80℃可保存三個(gè)月，pYES2質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>10³ cfu/μg DNA。

操作方法

1. 取100 µl冰上融化的BY4741感受態(tài)細(xì)胞，依次加入預(yù)冷的目的質(zhì)粒1-3 µg，Carrier DNA (96℃水浴3 min，快速冰浴

3 min，重復(fù)一次) 10 µl，PEG/LiAc 500 µl并吸打幾次混勻，30℃水浴30 min (15 min時(shí)翻轉(zhuǎn)6-8次混勻)。

2. 將感受態(tài)移到42℃水浴15 min (7.5 min時(shí)翻轉(zhuǎn)6-8次混勻)。

3. 5000 rpm離心 40 s棄上清，ddH₂O 400 µl 重懸，離心 30s棄上清。

4. ddH₂O 50 µl重懸，涂板，29℃培養(yǎng)48-96 h。

注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞在冰上融化。

2. 若使用pYES2質(zhì)粒表達(dá)蛋白，需在培養(yǎng)基中加入2%的半乳糖（篩選培養(yǎng)基中不用加半乳糖；當(dāng)需要目的蛋白表達(dá)時(shí)，需加入半乳糖代替葡萄糖作為碳源），以誘導(dǎo)目的基因的表達(dá)。

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。

4. 同時(shí)轉(zhuǎn)化2-3種質(zhì)粒時(shí)可增加質(zhì)粒的用量。

5. 酵母為真核生物，不易長(zhǎng)期保存，隨感受態(tài)在-80℃保存時(shí)間的延長(zhǎng)，轉(zhuǎn)化效率會(huì)不斷下降，建議保存時(shí)間不超過(guò)90天。

6. BY4741酵母菌株對(duì)高溫敏感，適生長(zhǎng)溫度為27-30℃；高于31℃，生長(zhǎng)速度和轉(zhuǎn)化效率呈指數(shù)下降。

7. 酵母在缺陷培養(yǎng)基中生長(zhǎng)速度比YPDA培養(yǎng)基慢，培養(yǎng)基中缺陷成分越多，生長(zhǎng)越慢，以轉(zhuǎn)化涂板為例：涂YPDA平板29℃，48 h培養(yǎng)可見(jiàn)直徑1 mm克??；涂SD單缺平板29℃，48-60 h培養(yǎng)可見(jiàn)直徑1 mm克隆，涂SD雙缺平板29℃，60-80 h培養(yǎng)可見(jiàn)直徑1 mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29℃，80-90h培養(yǎng)可見(jiàn)直徑1 mm克隆。