ER2566 Chemically Competent Cell

產(chǎn)品規(guī)格

ER2566：                                                    100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                    10μl

保存條件(保質(zhì)期)：                             -80℃（6個(gè)月） 

基因型

F- λ- fhuA2 [lon] ompT lacZ::T7 gene1 gal sulA11 Δ(mcrC-mrr)114::IS10 R(mcr-73::miniTn10-TetS)2 R(zgb-210::Tn10)(TetS) endA1 [dcm]

ER2566 Chemically Competent Cell產(chǎn)品說(shuō)明

ER2566菌株是NEB公司開(kāi)發(fā)的具有超高轉(zhuǎn)化效率的蛋白表達(dá)原核菌株，來(lái)源于BL21。Lac啟動(dòng)子啟動(dòng)下游T7RNA聚合酶的表達(dá)，可用于T7啟動(dòng)子表達(dá)載體(如pET系列)的高水平蛋白表達(dá)。fhuA2賦予ER2566菌株對(duì)噬菌體T1的抗性。同時(shí)ER2566為lon 和 ompT蛋白酶缺陷菌株。Lon蛋白酶和膜外蛋白酶OMPT的缺失能夠有效抑制表達(dá)的異源蛋白在大腸桿菌體內(nèi)的降解，Δ(mcrC-mrr)114，mcr-73突變的存在使ER2566菌株無(wú)法對(duì)外源DNA進(jìn)行標(biāo)記、限制，提高了外源甲基化DNA的轉(zhuǎn)化效率。ER2566感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率達(dá)10⁹ cfu/μg DNA。

操作方法

1.ER2566感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基(2YT或LB)，混勻后37℃，200rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。