Stbl4 Chemically Competent Cell

產品規(guī)格

Stbl4：                                                              100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                         10μl

保存條件(保質期)：                                  -80℃（6個月） 

基因型

F′ proAB+ lacIqZ?M15 Tn10 (Tet^R)mcrA ?(mcrBC-hsdRMS-mrr) recA1 endA1 gyrA96 gal- thi-1 supE44 λ- relA1?(lac-proAB)

Stbl4 Chemically Competent Cell產品說明

Stbl4菌株來源于 Stbl2 E. coli strain，可用于慢病毒載體或逆轉錄病毒載體的構建。Stbl4菌株適合克隆不穩(wěn)定插入片段 (正向重復序列，逆轉錄病毒序列等)；mcrA突變和mcrBC-hsd RMS-mrr deletion 使該菌株更適于克隆甲基化的基因組序列。recA 1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩(wěn)定和高純度質粒DNA的提取。lacI^qZΔM15標記使得Stbl4菌株可用于藍、白斑篩選。此菌株具有四環(huán)素抗性。生產的Stbl4感受態(tài)細胞經特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率可達1×10⁸ cfu/μg DNA。

操作方法

1. Stbl4感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質?；蜻B接產物）并用手打EP管底混勻，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇70分鐘。

當質粒中含有不穩(wěn)定片段時，30℃培養(yǎng)可降低錯誤重組的概率，若轉化control pUC19計算轉化效率，則需37℃，225 rpm復蘇60分鐘

4. 5000 rpm離心1分鐘收集菌體，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的LB培養(yǎng)基上，平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)17-20小時或30℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)20-24小時。若轉化control pUC19計算轉化效率，則需37℃培養(yǎng)過夜。

5.若要獲得大量，高純度質粒，建議在TB培養(yǎng)基中30度搖菌培養(yǎng)（以標準質粒PUC19為例：500ml三角瓶中加入100ml TB營養(yǎng)液，經30度250rpm搖菌，可提取約100-200ug PUC19質粒）

●TB 培養(yǎng)基配方
1.2%     Tryptone
2.4% Yeast Extract
4%        甘油
17mM   KH2PO4
72mM   K2HPO4
配制方法（1L）：
1，   配制磷酸緩沖液（0.17M  KH2PO4, 0.72M  K2HPO4）：
溶解2.31g KH2PO4和 12.54g K2HPO4于90ml去離子水中，定容到100ml，高壓滅菌。
2，在燒杯中加入以下試劑：Tryptone 12g， Yeast Extract    24g，甘油  4ml；加入去離子水800ml,充分溶解后，定容至900ml，高壓滅菌。
3，待溶液冷卻至60度以下，加入100ml 滅菌磷酸鹽緩沖液。

注意事項

1. 感受態(tài)細胞在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存

放會降低轉化效率。

2. 轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少終用于涂板的菌量。