CHO-K1 中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞（懸浮細(xì)胞）

細(xì)胞名稱

CHO-K1倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞亞株

細(xì)胞描述

該細(xì)胞株是源自成年中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢深入活體組織切片的CHO細(xì)胞的亞克隆。在本庫(kù)通過(guò)支原體檢測(cè)。

動(dòng)物種別：中國(guó)倉(cāng)鼠

性別：雌

組織來(lái)源：卵巢

形態(tài)：上皮細(xì)胞

細(xì)胞馴化前的培養(yǎng)基的培養(yǎng)條件

F12K培養(yǎng)基，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度。

供應(yīng)限制：僅供研究之用。

細(xì)胞株馴化： 

復(fù)蘇CHO-K1細(xì)胞轉(zhuǎn)入T25 cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶，以F12K基礎(chǔ)培養(yǎng)基添加10%血清培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)滿單層后，加入 0.25 % 胰蛋白酶消化，傳代至裝有*培養(yǎng)基的T25 cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶（Corning）中繼續(xù)培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞鋪滿瓶底時(shí)，即得貼壁 CHO-K1 細(xì)胞。取貼壁CHO-K1 細(xì)胞，換液，加入15 mL含血清的*基和 15 mL無(wú)血清CHO-K1培養(yǎng)基，2天后吸出一半培養(yǎng)液，加入等量的無(wú)血清CHO-K1，每2天重復(fù)一次此操作，直到胎牛血清濃度低于 1 %后，以基礎(chǔ)培養(yǎng)基B001 繼續(xù)培養(yǎng)，即培養(yǎng)基中血清濃度依次以 5 %，2 .5 %，1.25%，0.625 %，0 %降低。細(xì)胞在無(wú)血清CHO-K1培養(yǎng)基中密度達(dá)到5 ×106cells/ mL時(shí)，即得懸浮 CHO-K1 細(xì)胞。培養(yǎng)條件：37℃，5 % CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。

運(yùn)輸和保存

可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式

（1）干冰運(yùn)輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇；

（2）存活細(xì)胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng)，傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

（3）收到細(xì)胞后請(qǐng)拍照，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請(qǐng)及時(shí)拍照與我們聯(lián)系。

細(xì)胞用途：僅供科研使用。

CHO-K1 中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞（懸浮細(xì)胞）細(xì)胞接收后的處理：

1） 收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2） 在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)時(shí)，在低倍鏡（4或5X物鏡)下進(jìn)行，能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度。看細(xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?0X和20×物鏡下，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細(xì)胞需要售后時(shí)提供收到細(xì)胞時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3） 觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。

4） 貼壁細(xì)胞：在運(yùn)輸過(guò)程中貼壁細(xì)胞會(huì)有脫落的現(xiàn)象，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落或者脫落后抱團(tuán)生長(zhǎng)，可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細(xì)胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到加有按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中（或新的培養(yǎng)瓶中）。

5） 懸浮細(xì)胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基）。

6）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備：CHO GROW CD2 培養(yǎng)基    98 %

GlutaMAX-1谷氨酰胺              1%

P/S青霉素-鏈霉素   1%

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90% CHO-K1培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

注：次傳代推薦傳代比例為1:2，以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3） 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。   

下面T25瓶為類；

1，細(xì)胞凍存時(shí)，取上清，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2，4min ，1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細(xì)胞密度1-2xE6/ml，每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

3，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

聲明：細(xì)胞產(chǎn)品僅供科學(xué)研究之用，嚴(yán)禁轉(zhuǎn)售、共享、分發(fā)、出借、贈(zèng)送給任何第三方

關(guān)于細(xì)胞售后服務(wù)

1、收到細(xì)胞24小時(shí)內(nèi)出現(xiàn)細(xì)菌、真菌、霉菌污染，72小時(shí)檢測(cè)支原體陽(yáng)性屬于產(chǎn)品質(zhì)量問(wèn)題，無(wú)條件重發(fā)；需拍照我司確認(rèn)，且非客戶人為因素引起。

2、細(xì)胞運(yùn)輸途中受很多不可控因素（強(qiáng)烈震蕩，溫度變化，時(shí)間長(zhǎng)等）影響，達(dá)不到理想生長(zhǎng)狀態(tài)，收到后麻煩檢測(cè)細(xì)胞是否漏液，漂浮并且不能恢復(fù)貼壁能力，死亡等狀況，48小時(shí)內(nèi)提出并反饋如上情況，本公司為維護(hù)客戶利益，承諾給客戶免費(fèi)補(bǔ)寄一次，但不建議和不提供免費(fèi)補(bǔ)寄第二次及以上；

3、享有1個(gè)月的超長(zhǎng)售后期；