隨機(jī)引物法DNA探針標(biāo)記試劑盒產(chǎn)品及特點(diǎn)
本產(chǎn)品是基于Feinberg和Vogelstein發(fā)明的隨機(jī)引物標(biāo)記法而開發(fā)出來(lái)的即
用型DNA探針標(biāo)記試劑盒，標(biāo)記過(guò)程由雙鏈DNA熱變性、隨機(jī)引物與單鏈DNA結(jié)
合、在Klenow DNA聚合酶催化下，隨機(jī)引物法DNA探針標(biāo)記試劑盒引物的延伸合成DNA探針并摻入標(biāo)記的核苷酸
三步組成，可用下面的示意圖表示：
本產(chǎn)品在上述原理的基礎(chǔ)上本產(chǎn)品的特點(diǎn)是：
1. 使用十聚引物，復(fù)性效率比六聚引物更高。
2. 使用無(wú)外切活性的Klenow exo- DNA聚合酶，已標(biāo)記DNA探針不會(huì)被酶降解。
3. 快速，zui快1小時(shí)即可完成標(biāo)記反應(yīng)。
4. 所得DNA探針比活性高(對(duì)同位素可以達(dá)到10 9 cpm/ μ g DNA)，檢測(cè)靈敏度
高。
5. 所需模板DNA量少（只需要10 ng以上即可），DNA可以是各種形狀（線狀和
環(huán)狀）的、也可以是單鏈或雙鏈的，長(zhǎng)度在100 bp以上均可。
6. 得到的探針長(zhǎng)度在200-400 nt之間，可以用于Southern雜交、Northern雜
交、原位雜交、菌落和斑點(diǎn)印跡雜交等。
7. 三種標(biāo)記選擇，其中90603A可用于各種同位素標(biāo)記和其他任何非同位素標(biāo)
記，但需自備標(biāo)記底物；90603B和90603C可分別用于生物素和地高辛標(biāo)記。
使用及效果
將10ng-3 μ g的DNA模板在水（終體積不超過(guò)14 μ L）中變性5分鐘后放冰上，
加入2 μ L 10×標(biāo)記緩沖液、1 μ L Klenow exo-酶、1 μ L 標(biāo)記核苷酸（A型中不提
供），混合后37℃保溫1-20小時(shí)，加入1 μ L自備的0.5M EDTA終止反應(yīng)。所得標(biāo)
記探針可以直接使用或者放-20℃長(zhǎng)期保存。120312-2500    末端脫氧核苷轉(zhuǎn)移酶 (TdT)    2500U    1598    10-29
120312-500    末端脫氧核苷轉(zhuǎn)移酶 (TdT)    500U    398    10-29
120401-100    熱啟動(dòng) Taq DNA 聚合酶    100U    157    10-3
120402-1    PCR LIC 克隆套裝    1μg    990    6-17
120403-300    蝦堿性磷酸酶    300U    597    10-54
120404-500    堿性磷酸酶，牛小腸    500U    397    10-53
120405-25    堿性磷酸酶，大腸桿菌    25U    150    10-52
120406-15    柱式植物葉綠體 DNAout    15 次    1990    2-58
120407-5000    S1 核酸酶    5000U    190    10-74
120408-1000    綠豆核酸酶    1000U    190    10-75
120409-50    BAL31 核酸酶    50U    190    10-71
120410-750    核酸外切酶 I    750U    190    10-89
120411-50    T4 DNA 聚合酶     50U    197    10-14
120412-5000    微球菌核酸酶    5000U    390    10-76