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供貨周期	一周	規(guī)格	50T
貨號(hào)	XY-0033	應(yīng)用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè)
主要用途	熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。

非洲馬瘟病毒RT-PCR試劑盒

African Horse Sickness Virus(AHSV)

產(chǎn)品及特點(diǎn)

非洲馬瘟病毒(African Horse Sickness Virus，AHSV)會(huì)引起非洲馬瘟，是一種馬屬動(dòng)物的急性或亞急性傳染病，該病以發(fā)熱、皮下結(jié)締組織與肺水腫以及內(nèi)臟出血為特征，只能通過(guò)昆蟲傳播。馬對(duì)此病的易感性高，病死率高達(dá) 95%。本病發(fā)生有明顯的季節(jié)性和地域性，多見于溫?zé)岢睗窦竟?jié)，常呈地方流行或暴發(fā) 流行，傳播迅速，因此靈敏快捷的診斷產(chǎn)品具有重要的意義。為此本公司開發(fā)了本產(chǎn)品，可用于在科研領(lǐng)域快速定量檢測(cè)非洲馬瘟病毒。它具有下列特點(diǎn)：

1. 一站式，用戶不需要單獨(dú)準(zhǔn)備每種成分，包括引物和對(duì)照。

2. 根據(jù)非洲馬瘟病毒的保守基因序列設(shè)計(jì)的引物，具有良好的特異性。

3. 靈敏度可以達(dá)到 1000 拷貝/反應(yīng)。

4. 使用一管式 RT-PCR 技術(shù)，RT 和 PCR 兩步在一個(gè)試管內(nèi)完成，不需要中間轉(zhuǎn)移樣品，降低了操作誤差和可能的污染。

5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。

6. 本產(chǎn)品只能用于科研，不能用于臨床。

非洲馬瘟病毒RT-PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號(hào)	成分	規(guī)格
試劑一	5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer	200 μL（橘黃蓋）
試劑二	MMLV-Taq Mix	75 μL（紅蓋）
試劑三	超純水	1 mL（亮黃蓋）
試劑四	非洲馬瘟病毒 RT-PCR 引物混合液	100 μL（白蓋））
試劑五	非洲馬瘟病毒 RT-PCR 陽(yáng)性對(duì)	50 μL（黃蓋）
試劑六	使用手冊(cè)	1 份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為 12 個(gè)月。收到貨后陽(yáng)性對(duì)照需要跟其他成分分開放置，因?yàn)槠淙菀孜廴酒渌煞?，造成假?yáng)性。

自備試劑樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 如果有 N 個(gè)樣品，必須設(shè)置 N+2 個(gè)提取，多出的一個(gè)是 PC（樣品制備陽(yáng)性對(duì)照），一個(gè)是 NC（樣品制備陰性對(duì)照）。可以用 10μL 非洲馬瘟病毒 PCR 陽(yáng)性對(duì)照的 1000 倍稀釋液作為制備的陽(yáng)性對(duì)照。可以用水作為制備的陰性對(duì)照。制備所得成為樣品 RNA。

2. 用自選方法純化 N+2 個(gè)樣品的 RNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒 RNA 提取試劑盒兼容。

二、設(shè)置 RT-PCR 反應(yīng)（20μL 體系）

3. 如果有 N+2 個(gè)樣品，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管（額外增加的兩個(gè)管一個(gè)是 RT-PCR 陽(yáng)性對(duì)照，另一個(gè)是 RT-PCR 陰性對(duì)照）并按照下表在 PCR 管中加入下列成分：

成分	樣品管 N+2 個(gè)	PCR 陰性對(duì)照管	標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品管（2-7 管）
5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer	各4 μL	4 μL	4 μL
非洲馬瘟病毒 RT-PCR 引物混合液	各2 μL	2 μL	2 μL
N+2 個(gè)制備的 RNA 樣品	12.5 μL
超純水		12.5 μL
非洲馬瘟病毒 RT-PCR 陽(yáng)性對(duì)照的 1000 倍稀釋液			12.5 μL
MMLV-Taq Mix	1.5 μL	1.5 μL	1.5 μL

4. 上機(jī)進(jìn)行 RT-PCR，RT-PCR 反應(yīng)參數(shù)為:

過(guò)程	溫度	時(shí)間
逆轉(zhuǎn)錄	42℃	30 min
預(yù)變性	95℃	5 min
PCR 反應(yīng) （35個(gè)循環(huán)）	95℃	30 sec
	58℃	30 sec
	72℃	20 sec
延伸	72℃	7 min

5. 瓊脂糖電泳檢測(cè)擴(kuò)增效果。如果陰性對(duì)照有擴(kuò)增產(chǎn)物或陽(yáng)性對(duì)照無(wú)擴(kuò)增產(chǎn)物，則說(shuō)明實(shí)驗(yàn)失敗，需要分析實(shí)驗(yàn)失敗的原因。只有在陰性對(duì)照沒有擴(kuò)增產(chǎn)物、陽(yáng)性對(duì)照必須有預(yù)期條帶出現(xiàn)，才有必要分析樣品的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，如果有預(yù)期片段大小的擴(kuò)增產(chǎn)物則為陽(yáng)性，如果無(wú)則為陰性。