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供貨周期	一周	規(guī)格	50T
貨號(hào)	XY-0036	應(yīng)用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè)
主要用途	熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。

非洲豬瘟病毒LAMP試劑盒

African Swine Fever Virus(ASFV)

產(chǎn)品及特點(diǎn)

非洲豬瘟(African Swine Fever、ASF)是由非洲豬瘟病毒(African Swine Fever Virus、ASFV) 引起豬的一種急性、熱性、高度接觸傳染性疾病，病死率幾乎高達(dá) 100%，ASF 近在我國(guó)爆發(fā)，給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成重大損失，因此 ASFV 的快速準(zhǔn)確鑒定對(duì)該病的預(yù)防和檢疫有著重要作用，為此本公司開發(fā)了簡(jiǎn)單快捷的 ASFV 可視化 LAMP 檢測(cè)試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA。

2. 用 LAMP 恒溫?cái)U(kuò)增法擴(kuò)增 ASFV 特異片段，不需要熒光 PCR 等貴重儀器。同時(shí)擴(kuò)增時(shí)間只需要 1 小時(shí)，尤其適合現(xiàn)場(chǎng)或?qū)嶒?yàn)條件簡(jiǎn)陋的單位使用。

3. 檢測(cè)靈敏性比 PCR 高 10 倍以上。

4. 特異性高，由于使用四條針對(duì) ASFV 保守基因的特異引物，比使用 2 條引物的 PCR 專一性更高。

5. 提供無傳染性的陽(yáng)性對(duì)照，便于分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

6. 每個(gè)反應(yīng)的線性范圍：10E2-10E7 拷貝/μL，低靈敏度：10 拷貝/μL。

7. 本試劑盒足夠做 50 次 20μL 體系的 LAMP 擴(kuò)增。本產(chǎn)品只能用于科研。

非洲豬瘟病毒LAMP試劑盒規(guī)格及成分

編號(hào)	成分	規(guī)格
試劑一	2×可視化 UNG-LAMP MagicMix	500μL（綠蓋）
試劑二	非洲豬瘟病毒 LAMP 引物混合液	200μL（白蓋）
試劑三	非洲豬瘟病毒 LAMP 陽(yáng)性對(duì)照（1×10E8 拷貝/μL）	50μL（黃蓋）
試劑四	使用手冊(cè)	1 份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。MRSALAMP 陽(yáng)性對(duì)照單獨(dú)放置，不要污染其他試劑

自備試劑樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 用自選方法純化細(xì)菌樣品 DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼容，包括本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級(jí)版柱式病毒 DNAout，可去公司搜索。

2. 如果有 N 個(gè)樣品，則需要做 N+2 個(gè)樣品制備，包括一個(gè)樣品制備陽(yáng)性對(duì) 照（PC）和一個(gè)樣品制備陰性對(duì)照（NC）。樣品使用量根據(jù)所選擇的試劑盒決定。如果樣品使用量為 XmL，則在 XmL 水中加 10μLMRSA LAMP 陽(yáng)性對(duì)照的 10000 倍稀釋液作為樣品制備陽(yáng)性對(duì)照，樣品制備陰性對(duì)照是直接用 X mL 水作為陰性對(duì)照，然后和 N 個(gè)樣品一起進(jìn)行細(xì)菌 DNA 提取操作，得到 N+2 個(gè) DNA 樣品。

二、LAMP（20μL 體系）

3. 反應(yīng)設(shè)置：如果有 N+2 個(gè) DNA 純化樣品，則設(shè)置 N+4 個(gè) LAMP 擴(kuò) 增，增加 LAMP 陰性對(duì)照和陰性對(duì)照各 1 個(gè)。在 N+4 個(gè) PCR 管中加入下列成分：

成分	N+2 個(gè) 樣品管	LAMP 陰性對(duì)照管	LAMP 陽(yáng)性對(duì)照管
2 ×可視化 UNG-LAMP MagicMix	各 10 μL	10 μL	10 μL
非洲豬瘟病毒 LAMP 引物混合液	各4 μL	4 μL	4 μL
N+2 個(gè)樣品 DNA	各 6 μL
LAMP 陰性對(duì)照（水）		6 μL
LAMP 陽(yáng)性對(duì)照（非洲豬瘟病毒 LAMP 陽(yáng)性對(duì)照的 100 倍稀釋液）			6 μL

4. 混勻，此時(shí)反應(yīng)液呈現(xiàn)非常淺的藍(lán)色，由于是否有反應(yīng)是跟陰性對(duì)照和反應(yīng)前對(duì)比，所以一定要設(shè)置陰性對(duì)照，并且反應(yīng)前要手機(jī)照相留存以供反應(yīng)后比對(duì)。

5. 置于 25℃5 分鐘（讓 UNG 滅活可能的 LAMP 的污染），然后放 63℃擴(kuò)增 60 分鐘。如果是在 PCR 儀中保溫，必須加熱蓋。如果用金屬浴保溫，沒有熱蓋，必須在孔中加水以填充孔和管子間的空隙，并且在管中加 50uL 石蠟油，否則保溫期間反應(yīng)體系的水分會(huì)蒸發(fā)，影響反應(yīng)效率）。

6. 80℃10 分鐘滅活 Bst DNA 聚合酶和 UNG 酶。

7. 將反應(yīng)管放置在白色背景（如白紙）前觀察，觀察反應(yīng)液顏色并用手機(jī)照相留底。

8. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。陽(yáng)性對(duì)照將呈現(xiàn)藍(lán)色，無模板的陰性對(duì)照將呈現(xiàn)無色或非常淺的藍(lán)色，樣品管的顏色如果接近陽(yáng)性對(duì)照則說明有擴(kuò)增，如果接近陰性對(duì)照則說明無擴(kuò)增。標(biāo)準(zhǔn)的反應(yīng)結(jié)果如下圖（9 號(hào)為陰性，10 號(hào)為陽(yáng) 性，此處的 9 號(hào)和 10 號(hào)跟下步的電泳照片中的 9 號(hào)和 10 號(hào)是相同的兩個(gè)樣品）：