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上海信裕生物科技有限公司
中級會(huì)員 | 第11年

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當(dāng)前位置:上海信裕生物科技有限公司>>PCR試劑盒>>PCR-染料法>> 50次禽副粘病毒1型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

禽副粘病毒1型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

參   考   價(jià): 3990 3790

訂  貨  量: 1-4  件 ≥5  件

具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號(hào)50次

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地上海

更新時(shí)間:2020-07-23 14:58:21瀏覽次數(shù):477次

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供貨周期 一周 規(guī)格 50T
貨號(hào) XY-0077 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè)
主要用途 熒光定量PCR具有更高的擴(kuò)增效率、更高的擴(kuò)增靈敏度、更高的擴(kuò)增特異性。
禽副粘病毒1型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒熒光定量是群中等小的雙股 DNA 病毒,根據(jù)其理化性質(zhì)分 α、β、γ、未分類皰疹病毒四個(gè)亞科。皰疹病毒感染的宿主范圍廣泛,可感染人類和其他脊椎動(dòng)物。在自然界廣泛存在,主要侵犯外胚層發(fā)育而成的組織,例如:皮膚、粘膜和神經(jīng)組織。

禽副粘病毒1型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

Avian Paramyxovirus 1(APMV)

產(chǎn)品及特點(diǎn)

禽副粘病毒 1 型(Avian Paramyxovirus 1,APMV-1),主要危害雞、珠 雞和火雞,在被侵襲的雞群中迅速傳播,強(qiáng)毒株可使雞群全群毀滅。弱毒株僅引 起雞群呼吸道感染和產(chǎn)蛋量下降,但可迅速康復(fù)。人類可因接觸病禽和活毒疫苗 而引起結(jié)膜炎或淋巴腺炎,因此快速靈敏診斷具有重要意義。本產(chǎn)品以探針法熒光 定量 RT-PCR 技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測禽副粘病毒 1 型的試劑盒,它具有下 列特點(diǎn):

1. 即開即用,用戶只需要提供樣品 RNA 模板。

2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。

3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。

4. 特異性高,引物是根據(jù)禽副粘病毒 1 型高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會(huì)跟其他病毒的 RNA 發(fā)生交叉反應(yīng)。

5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應(yīng)。

6. 本產(chǎn)品只能用于科研。

禽副粘病毒1型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒規(guī)格及成分

編號(hào)

成分

規(guī)格

試劑一

探針法 qRT-PCR 緩沖液

500 μL(藍(lán)蓋) 

試劑二

探針法 qRT-PCR 酶混合液

100 μL(紅蓋) 

試劑三

熒光 PCR 模板稀釋液

1 mL(黃蓋)

試劑四

禽副粘病毒 1 型探針法 qRT-PCR 引物混 合液 

100 μL白蓋) 

試劑五 禽副粘病毒 1 型qRT-PCR 探針  50 μL(棕色管)
試劑六 禽副粘病毒 1 型探針法 qRT-PCR 陽性對 照(1×10E8 拷貝/μL) 50 μL(黃蓋)

試劑七

使用手冊

1 份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限為 12 個(gè)月。 

自備試劑 樣品 DNA。

使用方法 一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)。 由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能 污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原, 本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的 DNA 段作為陽性對照。

1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。

2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 RT-PCR 模板稀釋液,用帶芯槍 頭,下同)。

3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供),充分震 蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

4. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所 得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

5. 換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所 得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品 RNA 的制備

7. 如果有 N 個(gè)樣品,設(shè)置 N+2 個(gè)提取,多出的一個(gè)是 PC(樣品制備陽性 對照),一個(gè)是 NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?10μL 陽性對照的 10000 倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為 PC。另外用水作為 NC。

8. 用自選方法純化樣品的 RNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 RNA 提取試劑 盒兼容。也可以選購本公司的柱式病毒 RNAout。

三、Probe qRT-PCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)

9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè) 用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對照(用 水做模板),1 個(gè)用于 PCR 陽性對照(用第 4 號(hào)管的陽性對照稀釋液做模 板)。下面只以定量分析為例描述操作步驟。 10. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè) 置完畢后才設(shè)置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好 后后加): 

成分

樣品管 N+2 個(gè)

PCR 陰性 對照管

標(biāo)準(zhǔn)曲線 樣品管(2-7 管)

探針法 qRT-PCR 緩沖液

10 μL

10 μL

10 μL

探針法 qRT-PCR 酶混合液

2 μL

2 μL

2 μL

 禽副粘病毒 1 型 qRT-PCR 探針各 1 μL 1 μL 各 1 μL

禽副粘病毒 1 型探針法 qRT-PCR 引 物混合液

 各 2 μL

 2 μL

各 2 μL

 待測樣品 RNA 模板 各 5 μL  
超純水  5 μL 
 第 7 步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品稀釋液 (2-7 號(hào))   各 5 μL(2 號(hào) 樣到 2 號(hào)管, 3 號(hào)樣到 3 號(hào) 管…)

11. 蓋上蓋子后上機(jī),按下面參數(shù)進(jìn)行 qRT-PCR:

過程

溫度

時(shí)間

逆轉(zhuǎn)錄

50℃

30 min

 預(yù)變性 94℃ 10 min

 

qRT-PCR 反應(yīng) (40 個(gè)循環(huán))

94℃ 

15 sec

60℃

1 min(采集 FAM 通道的熒光信號(hào))

 

五、數(shù)據(jù)處理

12. 如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 RNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。

13. 如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照 Ct 必須大 于或等于 40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,有典型擴(kuò)增曲線,Ct 值應(yīng)該 小于或等于 30。對待測樣品,如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,如果小 于或等于 35 則為陽性。如果在 35-40 之間,則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的 Ct 值如果大于或等于 40 則為陰性,如果小于 40,則為陽性。

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